博凌科為的2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光染料法)有什麼要注意的沒有呀

2022-10-14 06:15:23 字數 3025 閱讀 7371

1樓:

博凌科為的2 x sybr green qpcr mix (熒光染料法)是採用sybr green i嵌合熒光法進行real time pcr的專用試劑。已經將熱啟動hotmaster taq dna聚合酶、dntp、特殊穩定劑、優化的反應緩衝液、bsa和sybr green i等試劑預混成一種適合real time pcr反應檢測用2×premix type試劑,具有靈敏度高、特異性強、穩定性好等特點。使用時只需加入模板和引物和水,便可在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線,對目的基因進行準確定量檢測,重複性好,可信度高。

本品採用全新的hotmaster taq dna 聚合酶,該酶不同於一般hot-start 酶之處在於,一般的hot-start 酶只在第一步溫度升高之前封閉酶的活性,而hotmaster taq dna 聚合酶是利用抑制劑通過溫度調節方式封閉hotmaster taq dna聚合酶的底物結合位點,溫度低於40℃時,形成非活性的酶-抑制劑複合物,當溫度升高至引物特異性的退火溫度時,結合平衡向模板-特異性引物複合物形成方向移動,因此最大限度的減少pcr擴增全程中的非特異性擴增產物產生,大大提高了熒光定量pcr反應的精確性。

注意事項:

1. 本製品不含內參染料rox,客戶並根據qpcr儀器技術指導決定是否需要加rox內參染料,用於消除訊號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光訊號誤差,配套rox產品貨號為pc38 rox reference dye。

2. 本製品含sybr® green i 強光下易分解,降低敏感度,使用時避免長時間強光照射本製品。

3. 建議在冰上配製pcr反應液,再放入pcr儀器中擴增。可以提高擴增特異性,減少背景。

4. 本製品含有4 mm mgcl2(反應體系終濃度是2 mm mg2+),可用25mm mgcl2 優化mg2+濃度。

2樓:浦恐

一樣的用法。注意避光低溫儲存即可

博凌科為 sybr green具有什麼樣的特點 ?具體操作方法是怎樣的?

3樓:

博凌科為 sybr green

sybr green i核酸染料(電泳用)

sybr green i是高靈敏的dna熒光染料,適用於各種電泳分析,操作簡單:無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg dna,高於eb染色法25-100倍。

sybr green i 與dsdna 結合熒光訊號會增強800-1000倍,用sybr green i染色的凝膠樣品熒光訊號強,背景訊號低。可適用於多種電泳分析。

sybr green i 適合於多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠,聚丙烯醯胺凝膠電泳,脈衝電場凝膠電泳,和毛細管電泳等。

sybr green i 與雙鏈dna的親和力非常高,因此可以用做電泳前染色,對分子生物學中常用的酶(如:taq 酶、逆轉錄酶、內切酶、t4連線酶等)沒有抑制作用。另外,sybr green i 與eb相比,誘變能力大大降低。

sybr green i 核酸染料特點

◆ 高靈敏:至少可檢出20pg dna,高於eb染色法25-100倍。

◆ 訊雜比高:樣品熒光訊號強,背景訊號低。

◆ 操作簡單:無須脫色或沖洗。

◆ 適用範圍廣:可適用於多種電泳分析。

◆ 使用方便:不影響其它修飾酶作用。

◆ 經濟:**比銀染便宜。

電泳用sybr green i 使用方法

sybr green i預染方法

◆ 該方法適於瓊脂糖凝膠電泳和page凝膠電泳

◆ 工作液的配製:用電泳緩衝液將10000×的sybr greenⅰ稀釋100倍,即為sybr greenⅰ工作液。sybr greenⅰ工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。

◆ 制膠:按常規方法制膠,不含任何染料。

◆ 樣品染色:向分析樣品中加入sybr greenⅰ工作液和載樣緩衝液,室溫放置10分鐘,使sybr greenⅰ與樣品中dna充分結合。sybr greenⅰ工作液加入量為總上樣量的1/10。

◆ dna marker染色:將5μl dna marker和5μl dna marker稀釋液和1μlsybr greenⅰ工作液混勻,室溫放置5分鐘,使sybr greenⅰ與dna充分結合。

◆ 上樣、電泳:按常規操作。

sybr green i後染方法

◆ 按照常規方法進行電泳。

◆ 用ph 7.0 - 8.5 的緩衝液(如:tae,tbe 或 te),按照10000:1的比例稀釋sybr greenⅰ濃縮液,混勻,製成染色溶液。

◆ 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振盪染色10-30分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯醯胺凝膠直接在玻璃平皿上染色,將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上,讓工作液均勻地覆蓋整個膠板,並染色30分鐘。

玻璃平皿必須預先經過矽烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。

◆ 用藍盾tm觀測。藍光可透過玻璃,觀測聚丙烯醯胺凝膠時,可直接將託有凝膠的玻璃平皿放入藍盾tm內觀測。

sybr green i使用注意事項

◆ 在」sybr greenⅰ預染色方法」中,電泳時間不要超過2小時,否則sybr greenⅰ會從dna上分離出來,會產生彌散狀條帶。

◆ 在常規用酒精沉澱核酸的過程中,sybr green i可以全部從雙鏈核酸上去掉。

◆ 如果想對用 sybr green i 染過的膠進行 southern blots,建議在預雜化和雜化溶液中加入0.1%- 0.3% 的sds。

◆ 在紫外照射透視下,與雙鏈 dna 接合的 sybr green i 呈現綠色熒光。如果膠中含有單鏈 dna 則顏色為橘黃而不是綠色。

◆ sybr green 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。

sybr green i熒光定量pcr

sybr green i與dsdna 結合熒光訊號可增強800-1000倍。在pcr反應體系中,加入過量sybr green i熒光染料,sybr熒光染料特異性地摻入dna雙鏈後,熒光訊號增強,而不摻入鏈中的sybr green i染料分子熒光不變,從而保證熒光訊號的增加與pcr產物的增加完全同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測定。

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