1樓：匿名使用者
最好是不要，這樣會減小重複之間的誤差。特別是需定量的樣品，混樣對定量結果的準確性是有影響的
實時熒光定量pcr的重複性好是什麼意思
2樓：為青生物
3個實驗重複的ct值的標準差在0.167以內（abi的標準），我們一般在0.5以內就可以了
實時熒光定量pcr的結果該怎樣分析？
3樓：群英鬥將
1、如果有標準曲線，按照標準曲線計算；
2、一般都是相對量，則用delta delta ct方法來計算；
3、引物或探針降解：可通過page電泳檢測其完整性；
4、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起；
5、看ct值是分析熒光定量pcr最直觀的一個資料，ct值一般在35左右就失去參考價值了，平時我們實驗室用biodai-pcr熒光定量法測得的擴增曲線的起跳值基本在30左右。
擴充套件資料：
pvr的迴圈引數：
1、預變性；
模板dna完全變性與pcr酶的完全啟用對pcr能否成功至關重要，加熱時間參考試劑說明書。
2、變性步驟；
迴圈中一般95℃，30秒足以使各種靶dna序列完全變性，可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹底，易造成擴增失敗。
3、引物退火；
退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的tm值為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然後在此次實驗基礎上做出預估。退火溫度對pcr的特異性有較大影響。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃進行（taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生設定為1min/kbp。
5、迴圈數；
大多數pcr含25-35迴圈，過多易產生非特異擴增。
6、最後延伸；
在最後一個迴圈後，反應在72℃維持10-30分鐘．使引物延伸完全，並使單鏈產物退火成雙鏈。
4樓：南京金益柏生物科技****
用2-△△ ct法算的話，應如何算？ 假設檢測a基因，ct分別為（這裡記住ct越大，表明相對含量越低） 普通組/test1：28 實驗組1/test2：
29 實驗組2/test3：30 這時候要設對照了，假設test1為對照組（普通組），當然是以普通組為對照 那麼，相對含量為。
5樓：匿名使用者
看ct值、起始拷貝數、標準偏差等
如果是sybr做的話，再看下溶解曲線
實時熒光定量pcr的原理
6樓：匿名使用者
熒光定量pcr原理：隨著pcr反應的進行，pcr反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針（bioghc elitefast sybr kit）和熒光染料（bioghsc super probe kit）
7樓：匿名使用者
所謂的實時熒光定量 pcr 就是 通過對 pcr 擴增反應中每一個迴圈產物熒光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時熒光定量 pcr 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著
pcr 反應的進行， pcr 反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
實時熒光定量pcr與普通pcr的區別是什麼？結果有何異同？能說明的問題是什麼？
8樓：麼破1自我
二者結果相同。都能說明生物體外的特殊dna複製的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。
區別：1、二者系統組成不同
熒光定量pcr儀比普通的pcr儀多了熒光訊號採集系統和計算機分析處理系統。
2、二者原理不同
熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光，普通ocr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量。
3、二者反應要求不同
熒光定量pcr對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通pcr可以擴增長點的片段。
4、二者應用不同
熒光定量pcr主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的，普通的pcr儀是做定性分析和擴增基因片段，定量pcr儀可以做普通pcr儀的工作，反之不行。
5、二者測量成本不同
定量pcr儀**較為昂貴，普通的基因擴增儀(pcr儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是**要低很多，而且執行成本也要低很多。
實時熒光定量pcr技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的侷限，實現了每一輪迴圈均檢測一次熒光訊號的強度，並記錄在電腦軟體之中，通過對每個樣品ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。
9樓：匿名使用者
原理不同：熒光定量pcr實時監
測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量，一般是紫外光。
反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段。如果不需要檢測產物分子量大小，熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析，普通pcr必須電泳。
結果：熒光定量可以實現精確定量，普通pcr則不行。熒光定量體現可以看到整個擴增過程，可以看到擴增效率，溶解溫度，直接得到的標準曲線等，這些是普通pcr無法實現的。
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛，希望可以幫到你
10樓：匿名使用者
所謂實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行「定量分析」的方法。
記住，實時熒光定量是定量分析
11樓：匿名使用者
熒光pcr是為了測量mrna表達量的 普通pcr是為了擴增目的片段的
12樓：匿名使用者
熒光定量是定量的，普通pcr是定性的，結果一個是說明含有多少，另一個說明有還是沒有，前者更精確一點
實時熒光定量pcr與基本pcr相比有什麼優點
13樓：杏雀烈
熒光定量pcr與普通pcr相比具有以下優點：
1、高靈敏性 可檢測單個細胞基因；
2、高特異
14樓：匿名使用者
普通的pcr大多數是定性實驗，而實時熒光定量pcr則定量和定性都可以做。應用領域也不一樣，普通pcr一般應用於基因組克隆、dna測序、rna反轉錄等，而實時熒光定量pcr一般應用於mrna表達量分析、絕對定量、蛋白表達、snp分析、陰陽性解析等領域。不是定量pcr比pcr好，而是兩者應用與不同的領域，起到了不同的作用。
熒光定量pcr較普通pcr不同的一點就是可以實時檢測pcr擴增產物，從而可進行絕對定量或者相對定量。
15樓：奔馬的香香豬
pcr實驗主要採用sybr green染料法和taqman探針法，biog技術採用經化學修飾的熱啟動聚合酶，有效避免了非特異擴增，具有高度的特異性。反應緩衝液經多次優化，與熱啟動聚合酶具有最為樂觀的搭配，使聚合酶的活效能夠得到最大程度的發揮。反應靈敏快速，40個迴圈只需20多分鐘的時間。
在20ul的反應體系裡，只要有幾個拷貝的dna分子就能被檢測出來。
您好，我想問一下實時熒光定量pcr的資料分析！
16樓：傻蛋嘟嘟
用2-△△ ct法算的話，應如何算？
假設檢測a基因，ct分別為（這裡記住ct越大，表明相對含量越低）普通組/test1：28
實驗組1/test2：29
實驗組2/test3：30
這時候要設對照了，假設test1為對照組（普通組），當然是以普通組為對照
那麼，相對含量為：
普通組/test1：1
實驗組1/test2：2^-(28-29)=1/2=0.5實驗組2/test3：
2^-(28-30)=1/4=0.25a基因在實驗組1和實驗組2中的表達量，分別下降2倍和4倍！
所以，就出來啦，結果
對於每組不同部位的比較的話，將其中一個處理為1進行比較嗎？
如實驗組1
testis
brain
liver
muscle
可以把任何一個作為1，作為對照，但是要在figure 的legend中註明出來，說清楚就好了！
那對於三個組中的同一部位的比較的話，難道也要將其中一組處理為1嗎？
是的，可以，如
brain
普通組/test1
實驗組1/test2
實驗組2/test3
就以普通組/test1，為對照組，設為1，其他為相對含量，也要在figure 的legend中註明出來說清楚！
17樓：匿名使用者
這個很簡單。你把普通組的某個部位的相對量設為1。其他的，不管是組內的，還是組間的，都用△△ct的方法算出相對量。
再進行比較。基本概念就是設一個點為基點，其他的都是相對值。不要每比一次都設一個1。
實時熒光定量pcr內參是什麼東西
18樓：禾鳥
1、實時熒光定量pcr內參：
在不同的pcr反應管中已定量的內參和引物，內參用基因工程方法合成。上游引物用熒游標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內參也被擴增。
在pcr產物中，由於內參與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內參為對照定量待檢測模板。
2、選擇：內參一般是固定的，可以用實驗室之前就有的。或者用基因工程方法合成。上游引物用熒游標記，下游引物不標記。
擴充套件資料
（1）內參在傳統定量中的作用：
由於傳統定量方法都是終點檢測，即pcr到達平臺期後進行檢測，而pcr經過對數期擴增到達平臺期時，檢測重現性極差。同一個模板在96孔pcr儀上做96次重複實驗，所得結果有很大差異，因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量。
加入內參後，可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。
（2）內參對定量pcr的影響：
若在待測樣品中加入已知起始拷貝數的內標，則pcr反應變為雙重pcr，雙重pcr反應中存在兩種模板之間的干擾和競爭，尤其當兩種模板的起始拷貝數相差比較大時，這種競爭會表現得更為顯著。
但由於待測樣品的起始拷貝數是未知的，所以無法加入合適數量的已知模板作為內參。也正是這個原因，傳統定量方法雖然加入內參，但仍然只是一種半定量的方法。
19樓：小笑聊情感
實時熒光定量pcr內參是一種在dna擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（pcr）迴圈後產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定dna序列進行定量分析的方法。
20樓：匿名使用者
內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因，又叫看家基因，比如常用的gapdh， actin。或者18s rrna也可以。
如果內參表達量一致，說明你pcr的上樣量一致，樣本的質量也一致。如果出入很大，說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基因的表達量就不可靠了
實時熒光定量pcr加入的cdna的a260 280很低，有影
沒有bai影響，實時熒光定du量pcr quantitative real time pcr 是一種在zhidna擴增反應中，以熒光化dao 學物質測每次聚合版酶鏈式反應 pcr 迴圈 實時熒光定量pcr，cdna的加入量會影響結果的準確度嗎 兩者沒有必然的聯絡，準確度一般是儀器決定的，不同的儀器準...
熒光定量pcr的原理,熒光定量PCR的原理
pcr擴增時在加入一對引復物的同時制加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收 剛開始時,探針結合在dna任意一條單鏈上 pcr擴增時,tap酶的5 端 3 端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團...
實時熒光定量PCR可以用來精確測定DNA濃度嗎
不是用來測濃度的，可以用來做基因的拷貝數。測濃度最經典的還是紫外分光光度計，當然會有偏差，不過總體來說還是可以的。也可以用酶標儀。實時熒光定量pcr不是用來測濃度的，可以用來做基因的拷貝數。但是如果你的產物單一，有相應的標準品，也是可以測濃度的，濃度的準確性和你的標準曲線相關。實時熒光定量pcr 實...