1樓：京贊蓮
啟動子(promoter)dna模板上專一地與rna聚合酶結合並決定轉錄從何處起始的部位，也決定基因的轉錄棗凱效率。生物中有許多啟動子，如大腸桿菌約有2000個啟動子。各啟動子的效率可不相同，大腸桿菌的強啟動子每2秒鐘啟動一次轉錄，而弱啟動子每10分鐘才啟動一次，從百多個大腸桿菌啟動子結構的分析，得知兩個強啟動子的同源序列的中心在轉錄起始部位(基因編碼鏈上第乙個者襪核苷凳嫌喚酸) 5'側約10和35個核苷酸處，弱啟動子序列中往往有多處核苷酸被置換。
許多原核生物都含有這兩個重要的啟動子區：
真核生物的啟動子部位與原核生物不同，而且啟動轉錄的活性，除需啟動子外，還需某些外加序列。
2樓：外號小子真帥
3、 宿主選擇。
常見的宿主有大腸桿菌、哺乳動物細胞、酵母以及昆蟲。以大腸桿菌來說，最適合做異源表達的菌株為bl21及其衍生菌株，但仍需要根據載體中選擇的轉錄、翻譯元件來挑選。bl21中內源性的蛋白酶基因缺失，因此是一種適合於外源蛋白表達的菌株，但是它沒有t7 rna聚合酶，所以不能用於含t7啟動子蛋白表達；bl21(de3)，在bl21的基礎上整合了t7噬菌體基因組，適合t7表達系統，如pet系列；bl21(de3)plyss，在bl21(de3)基礎，附帶了t7溶菌酶基因，可以更為嚴謹控制t7聚合酶的表達。
需要注意的是，由於核酸內切酶（enda1）重組酶（reca1）等基因的存在，質粒在bl21系列菌株中不那麼穩定，可能出現整合至基因組、丟失、突變等現象，所以構建好的載體仍需儲存在dh5α之類的菌株中。
4、 培養條件優化。
以大腸桿菌表達系統為例，菌種復甦和種子培養時都可以使用lb培養基，在神氏燃發酵階段使用氨基酸含量更高但糖源更低的培養基則更好，如tb培養基，以遊虛促進蛋白質的合成和積累。如果使用的是誘導型的啟動子，則應在菌體生長至對數生長期後核察期時加入iptg之類的誘導劑。加入誘導劑後，培養溫度需要調低至16-30℃。
培養溫度越低，蛋白質累積的越慢，越不容易產生包涵體。
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