在測定酶活力時,為什麼對試劑配置 實際用量 血清用量 溫度 PH 作用時間均需嚴格控制 求認真解答

2021-03-22 05:37:07 字數 4698 閱讀 2789

1樓:匿名使用者

穀物種子萌發時澱粉酶活力的測定

幾乎所有植物中都存在澱粉酶,尤其是萌發的禾穀類種子,澱粉酶活性最強。主要是α-澱粉酶和β-澱粉酶。種子萌發時,澱粉酶活性隨萌發時間迅速增加,將澱粉分解成小分子糖類,供幼苗生長。

α-澱粉酶隨機水解澱粉的α-1,4-糖苷鍵,作為澱粉分解的起始酶而起主要作用;其水解產物為麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原性糖;β-澱粉酶水解非還原端的第二個α-1,4-糖苷鍵,水解產物為麥芽糖,並能使一部分糊精糖化。本實驗以萌發種子為材料,測定其中α-澱粉酶和β-澱粉酶活性的差異。

【原理】

兩種澱粉酶具有不同理化特性,α-澱粉酶不耐酸,在ph3

在測定酶活力時,為什麼對試劑配置、實際用量、血清用量、溫度、ph、作用時間均需嚴格控制?

2樓:匿名使用者

法1:稱取硫酸銅(cuso4.5h2o)34.

7g溶於500ml蒸餾水中。靜置一天後過濾。b :

稱取酒石酸鈉鉀173g加氫氧化鈉50g共同溶於蒸餾水並稀釋至500ml,靜置二天後過濾

法2:1)取硫酸銅結晶 6.93 g.加水使溶解成 100 ml.

(2)取酒石酸鉀鈉結晶 34.6 g 與 氫氧化鈉 10 g.加水使溶解成 100 ml.

法3:稱取無水na2co340g,溶於100ml蒸餾水中,溶後加酒石酸7.5g若不易溶解可稍加熱,冷卻後移入1000ml的容量瓶中。

另取純結晶cuso4 4.5g溶200ml蒸餾水中,溶後再將此溶液傾入上述容量瓶內,加蒸餾水至1000ml刻度,放置備用。

法3最好。

鹼性銅試劑是測量微量還原性糖的重要方法。

測定酶活力時,為什麼要控制酶的稀釋倍數

3樓:匿名使用者

1.底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。

2.酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。

3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃。高於或低於最適溫度,酶活性都降低。

4.離子強度和ph值 在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低。

5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。

6.啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高。因此在酶活性測定時也,要滿足酶對啟用劑的需要。

7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制.抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。

提取rna過程中為什麼要嚴格控制時間,溫度,ph值

4樓:北京索萊寶科技****

因為rna極易被降解,如果提取後變成ntp了還有什麼意義吶?

時間越短降解越少

溫度也是,ph也是,都需要嚴格控制

5樓:

if(keypress==true)檢測有鍵按下 } }

測定酶活力時應遵循哪些基本原則

6樓:邂逅

(1)酶促反應過程中,只有最初一段時間內反應速度與酶活性成正比,隨著反應時間的延長,反應速度即逐漸降低。

(2)要規定一定的反應條件,如時間、溫度、ph等,並在理酶測定過程中保持這些反應條件的恆定,如溫度不得超過規定溫度的士1℃,ph應恆定。

(3)配製的底物濃度應準確且足夠大,底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑並儲存於冰箱中,以防止底物被分解。

(4)標本要新鮮,由於絕大多數酶可因久置而活力降低,標本如無法及時測定,應儲存於冰箱中。用血漿時,應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞、血小板中的濃度比血清高,為此在採血、分離血清時,應注意防止溶血和白細胞的破裂。

酶活力測定的注意事項有哪些

7樓:牙口竟品點

注意事項:

1.底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]範圍一般選擇在10~20km為宜,此時反應速度基本達到最大反應速度,測定的誤差在可接受範圍。

2.酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說,只有[s]>>[e]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定。

3.溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37~40℃,高於或低於最適溫度,酶活性都降低。目前,酶活性的測定溫度尚未統一,但常規實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(q10)表示。

溫度係數指溫度每升高10℃,化學反應速度增加的倍數。q10通常為l~2。由溫度係數得知,溫度的變化對酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行,溫度波動要控制在±1℃。

4.離子強度和ph值 在最適ph時,酶的活性最強,高於或低於最適ph,酶的活性都降低,多數酶的最適ph在5~8之間。在測定酶活性時,要求緩衝液具有足夠的緩衝容量,以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩衝溶質,具有較強的緩衝能力。

為了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響,使ph不致偏離設定值,標本用量不宜過大,血漿或血清標本體積/反應液體積≤1/10為宜。

5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子,例如zn2+是羧基肽酶的輔基,mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給。

6.啟用劑 有些酶在有啟用劑存在時才有活性或活性較高,例如mg2+是肌酸激酶的啟用劑,cl-是澱粉酶的啟用劑。因此在酶活性測定時,也要滿足酶對啟用劑的需要。

7.抑制劑 酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制;丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制;哇巴因對na+,k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響。

綜上所述,測定酶活性時,最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和啟用劑、避免抑制劑的原則。

植物組織培養的流程

8樓:中國農業出版社

植物組織培養可以分為四個階段:

(1)建立無菌體系,即外植體及培養基的消毒、接種,獲得愈傷組織或器官。

(2)進行增殖,不斷分化產生新的植株,或直接產生不定芽及胚狀體,也可以根據需要反覆進行繼代培養,以達到大量繁殖的目的。

(3)將植株轉移進行生根培養,可以轉入生根培養基,也可以直接切取進行扦插生根。

(4)試管苗過渡,即試管苗出瓶後進行一定時間對外界環境的適應過程。

9樓:匿名使用者

一個完整的植物組織培養過程一般包括以下幾個步驟:

(1)準備階段

查閱相關文獻,根據已成功培養的相近植物資料,結合實際制訂出切實可行的培養方案。然後根據實驗方案配製適當的化學消毒劑以及不同培養階段所需的培養基,並經高壓滅菌或過濾除菌後備用。

(2)外植體選擇與消毒

選擇合適的部位作為外植體,採回後經過適當的預處理,然後進行消毒處理。將消毒後的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊,或剝離出莖尖,挑出花葯,接種到初代培養基上。

(3)初代培養

接種後的材料置於培養室或光照培養箱中培養,促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織,或頂芽、腋芽直接萌發形成芽。然後將愈傷組織轉移到分化培養基分化成不同的器官原基或形成胚狀體,最後發育形成再生植株。

(4)繼代培養

分化形成的芽、原球莖數量有限,採用適當的繼代培養基經多次切割轉接。當芽苗繁殖到一定數量後,再將一部分用於壯苗生根,另一部分儲存或繼續擴繁。進行脫毒苗培養的需提前進行病毒檢測。

(5)生根培養

剛形成的芽苗往往比較弱小,多數無根,此時可降低細胞**素濃度或不加,提高生長素濃度,促進小苗生根,提高其健壯度。

(6)煉苗移栽

選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗,待苗適應外部環境後,再移栽到疏鬆透氣的基質中,注意保溫、保溼、遮蔭,防止病蟲危害。當組培苗完全成活並生長一定大小後,即可移向大田用於生產。

如:莖尖→表面消毒→接種誘導培養基→莖尖生長→病毒檢測鑑定→培養無根小植株→培養生根→完整小植株→煉苗20-25天→移栽成活。

常規情況下詳細的生產流程圖如下:

對不同的品種詞流程會略有差異,如進行果樹育苗還需進行嫁接等操作流程,但對組培工廠化育苗而言,一般可根據上面的流程圖來安排各項作業,只有相互銜接好、配合好,才能提高生產效益。

酶只有溶於水才能起催化作用嗎? 5

10樓:叮噹咪咪

不是阿!酶有太多太多種類....你可以自己查一下啊

11樓:匿名使用者

不是~酒精啊~什麼的液體也可以!

為什麼測酶活力時已測初速度為宜,並且底物濃度應大大超過酶濃度

底物濃度大,可以保證酶的底物結合位點全部結合,處於飽和狀態,此時酶的反應速度最大。但是隨著反應的進行,產物會對酶的活性產生反饋性抑制,所以測初速度可以避免這種抑制的影響。其實,測酶活性不應該只用一個底物濃度,而是逐步增加。這樣就可以繪製反應曲線,不僅得到vmax,還可以得到s50,也就是1 2vma...

在測定胃蛋白酶活性時,當溶液的PH值由10降到2的過程中,胃

我也覺得你們老師錯了,你可以看下面的連線 學生錯選 c 分析 受已知條件 胃蛋白酶活性的最適活性為ph 1.8 干擾,學生常錯選c。但ph值過高會使酶的活性喪失,且具不可恢復性,所以正確答案為b。對啊,ph10的時候,酶的活性就已經失去了,是不可逆轉的,所以沒有變化,選b.好象以前做過這個題 一開始...

植物酶基因表達的測定為什麼提取的是rna

中心法則 dna轉錄成為rna,rna翻譯成為蛋白質,蛋白質稱為各個功能的表達者,但是dna轉錄出來的rna並不一定全部翻譯成為蛋白質,dna轉錄成為rna後經過剪下修飾才能進一步翻譯成為蛋白質,所以想要看某一個基因的表達量,用dna做為模版是不準確,用rna的話才能確定基因的表達量。dna rna...