植物酶基因表達的測定為什麼提取的是rna

2023-02-19 02:45:18 字數 3296 閱讀 4780

1樓:匿名使用者

中心法則:dna轉錄成為rna,rna翻譯成為蛋白質,蛋白質稱為各個功能的表達者,但是dna轉錄出來的rna並不一定全部翻譯成為蛋白質,dna轉錄成為rna後經過剪下修飾才能進一步翻譯成為蛋白質,所以想要看某一個基因的表達量,用dna做為模版是不準確,用rna的話才能確定基因的表達量。

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植物rna為何不易提取 提rna總是提不出來,為什麼?

2樓:前炭繳泛指叵

可以選擇rna表達高峰時期的植物組織來提取,比如幼苗。還有就是注意rna酶的降解。

3樓:酸棗樹

買個好的試劑盒,華越洋生物的植物rna提取試劑盒,用了你就知道了。

4樓:

因為rna容易降解,可用大公司的試劑盒。

檢測基因表達的方法

5樓:小小芝麻大大夢

主要用探針檢測mrna或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mrna的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)

一、外源基因轉錄水平的鑑定。

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段,轉錄是以dna(基因)為模板生成mrna的過程,翻譯是以mrna為模板生成蛋白質的過程,檢測外源基因的表達就是檢測特異mrna及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。

即轉錄水平上對特異mrna的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是northern雜交,它是以dna或rna為探針,檢測rna鏈。和southern雜交相同,northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用rt-pcr(reverse transcribed pcr)方法檢測外源dna在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總rna或mrna為模板進行反轉錄,然後再經pcr擴增。

如果從細胞總rna提取物中得到特異的cdna擴增條帶,則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速,但對外源基因轉錄的最後決定,還需與northern雜交的實驗結果結合。

二、外源基因表達蛋白的檢測。

表達蛋白的檢測方法有三種:

1、生化反應檢測法:主要通過酶反應來檢測;

2、免疫學檢測法:通過目的蛋白(抗原)與其抗體的特異性結合進行檢測,具體方法有western雜交、酶聯免疫吸附法(elisa)及免疫沉澱法;

3、生物學活性的檢測。

western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠(sds-page)電泳分離抗原(antigen)固定在固體支援物上(如硝酸纖維素膜,nc膜)。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同,據此可確定特定的抗原存在與否以及相對丰度,或者蛋白質是否遭到降解等。

蛋白質電泳後轉到nc膜,放在蛋白質(如牛血清蛋白bsa)或奶粉溶液中,溫育,以封閉非特異性位點,然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交,抗原-抗體結合,再通過放射性自顯影或顯色觀察。

6樓:匿名使用者

補充:逆轉錄pcr和實時pcr的縮寫都是rt-pcr

實時pcr沒做過,不知道有什麼用。

逆轉錄pcr就是擴增目專的rna的意思。就屬是使少量的目的rna擴增成大量的dna。如果能擴增成功,則說明樣品中含有目的rna。這一步只能說明目的基因被轉錄了。

northern blot也是用來檢測rna的,可以大致地檢測出含有目的序列的rna有多少種。大致地。

western blot是用來檢測蛋白質的。先製作針對目的蛋白質的抗體,然後用這個抗體檢測目的蛋白質。如果樣品含有目的蛋白,那麼抗體會和這個蛋白結合,並能相對容易地被檢測出來。

所謂直接檢測,是指如果那個基因能產生一些很明顯的東西(譬如產生特殊的酶、發光、使葉子變成金色、多長一隻眼睛。那麼就根據這些來直接檢測那個基因有無表達。

詳情請看wiki

請教jcn168:

regular pcr 是如何 monitor the transcription 的?

7樓:匿名使用者

檢測基因表抄達的方法:

轉錄水襲。平檢測:rt-pcr,real-time pcr,northern blot

翻譯水平檢測:western blot

還有直接檢測,如報告基因、融合熒光蛋白等。

———我是一樓)——rt-pcr是反轉錄pcr,是半定量方式。real-time pcr可以精確定量。 二者不同。

後者為了區別於rt-pcr,一般不縮寫。

8樓:你and你

先提取rna,然後把rna反轉錄成cdna,再對cdna進行qpcr擴增,就能測目的基因的表達量。

ìáè¡dnaê±rna㸵äê¹óã

植物中總dna的提取ctab法 如何去除dna樣品中的rna

9樓:匿名使用者

因為ctab法提取的dna總會或多或少地有rna殘留,並不影響一般的pcr實驗。如果有特殊實驗需要去除rna,常用的方法是加rna酶進行消化。

trizol法提取rna如何避免dna汙染

10樓:國際不配叫米蘭

專兩層,取rna層的時候吸取一定要屬小心,吸得時候一定要緩慢,不要怕浪費,有的人吸得很多,很怕浪費,結果就吸到了中間層和下層,個人覺得吸取80%最多了,再多就很容易吸到雜質了,操作要小心,動作快速準卻,這樣才能提到高質量的rna

11樓:9武

1,裂解組織或者細胞使用的。

trizol量偏少;

2,使用的組織材料中含有大量的有機回溶劑(如:乙醇/異丙醇答等)、高純度的buffer、鹼性溶劑等;

3,如果提取的rna中含有dna時,也可以使用dnase i進行dna消化。

12樓:匿名使用者

除了上樓的方法—復—一般操作都需制要那樣進行的。

還有bai,如果你對rna質量du要求很高的話,可以用zhidna酶去除daodna汙染。不過有可能導致rna的部分降解。或者也可以純化rna,這些步驟都可以避免dna汙染。

不過dna酶慎用!

13樓:比哦三代眼

我也是bai類似問題,rna用dutaq酶擴出片段。。。悶zhi可以在rt前用dnase1處理~

方法dao:rna(1ug)回+buffer(1ul)+water(to9ul)+dnase(1ul) 37度。

答30分。+ 25mm edta 60度 10分鐘。

然後不換管直接在裡面加rt的東西 最後定容到20ul 上pcr

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