Taq DNA聚合酶的應用與改造歷程

2025-05-06 21:10:09 字數 1163 閱讀 1921

taq dna聚合酶簡介

1樓:黑科技

1 拼音 2 註解。

taq dna jù hé méi

taq dna聚合酶是從一種水生棲熱菌(thermusaquaticus)yt1株分離提取的。yt是 一種嗜熱真菌,能在70~75℃生長。該菌是1969年從美國黃石手禪國家森林公園火山溫泉中分離的。

該酶基因全長2496個堿基,編碼832個氨基酸,酶蛋白分子為 94kda.其比活性為200000單位/時每個酶分子每秒鐘可延伸約150個核苷 酸,70℃延伸率大於60個核苷酸/秒,55℃時為24個核苷酸/秒。溫度過高(90℃以上) 或過低(22℃)都可影響taq dna聚合酶的活性,該酶雖然在90℃以上幾乎無dna合成, 但確有良好的熱穩定性,在pcr迴圈的高溫條件下仍能保持較高的活性。

在.5℃時,pcr混合物中的taq dna聚合酶分別經130min,40min和5~6min後,仍可 保持50%的活性,實驗表明。pcr反應時變性溫度為95℃~20sec,50個迴圈後,taq dna聚合酶仍有65%的活性。

taq dna聚合酶的熱穩定性是該酶用於pcr反應的前提條 件,也是pcr反應能迅速發展和廣泛應用的原因。taq dna聚合酶還具有逆轉錄活性, 其作用於類似逆轉錄酶。此活性溫度一般為65~68℃,有mn2 存在時,其逆轉錄活性 更高。

taqdna聚合酶是mg2 依賴性酶,該酶的催化活性對mg2 濃度非常敏感。以活性程度 很低的鮭魚 **dna為模板,dntp的濃度為時,用不同濃度mg2 進行 pcr反應10min,測定結果為mgcl2濃度在時該酶催化活性最高,此濃度能最 大限度地啟用taqdna聚合酶的活性,mg2 過高就抑制酶活性,當mgcl2濃度在 10mmol/l時可抑制40~50%的酶活性。由於mg2 能與dntp結合而影響pcr反應液中游離 的mg2 濃度,因而mgcl2的濃度在不同的反應體系中應適當調整,優化濃度。

一般反應 中mg2 濃度至少應比dntp總濃度高適當濃度的kcl能使taq dna聚合 酶的催化活性提高50~60%,其最適濃度為50mmol/l,高於75mmol/l時明棗皮顯抑制該酶 的活凳薯差性。

taq聚合酶的介紹

2樓:暖融融

taq聚合酶的缺點之一為催化dna合成時的相對低保真性。它缺乏3』→5』核酸外切酶的即時校正機制,出錯率為1/90000。

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相同點 都能以dna為模板,從5 向3 進行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應。不同點 dna聚合酶識別脫氧核糖核苷酸,在dna複製中起作用 而rna聚合酶聚合的是核糖核苷酸,在轉錄中起作用。rna聚合酶是細bai胞中的基因進行轉錄時用du的,它具 zhi有解旋功能 dao而dna聚合酶則是大腸桿菌內進行...

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