1樓：浦恐
退火溫度72℃也可以了。
注意pfu酶延伸速度低於taq，請適當延長延伸時間。
還有注意體系裡面加沒加鎂。
酶濃度增加一倍試試。不行的話換一管酶看。
換新酶試過了麼？
2樓：
.還是使用基因工程篩出來的更好的酶比較有效，現在很多大牌生物公司都有自己的專利產品，
我用的是 takara primerstar hs，速度和擴增效率同taq一樣，保真性超過pfu ，非常好，就是比較貴，一套500￥。.
3樓：***
pcr有時候非常敏感，換臺機器都不行。試試touch down吧。
4樓：又一沙鷗
可能是引物問題，或者做個鎂離子濃度梯度看看
為什麼我用普通pcr擴出來的片段大小和用高保證酶擴出來的片段不一樣長呢？ 10
5樓：新東方**醫院
1，片段不一樣長你是怎麼知道的？如果是跑電泳的話，有差別是正常現象，即使是一樣的片段不同次的電泳位置可能也有差別。和你的pcr體系也有關係，片段在不一樣的體系裡，也影響跑電泳的位置。
2，不一樣的酶擴增到最後也不一樣，有的酶會在片段最後面加polya，有的就不加，長度也可能不一樣。
6樓：匿名使用者
這個應該是你引物特異性的問題，如果你不怕麻煩或者是真心想弄懂這個問題的話，你可以把兩個pcr產物克隆到t載體中，然後測序！
7樓：匿名使用者
跑電泳看的結果不是特別準確的，就算是同樣的pcr也可能每次都不一樣，最準確的就是找個生物公司測序
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