用於觀察線粒體的熒光染色劑

2021-05-03 22:54:12 字數 1333 閱讀 1559

1樓:匿名使用者

健那綠(janus green b)染液

健那綠(janus green b)染液是專一性染線粒體的活細胞染料,可以使活細胞中的線粒體呈現藍綠色,而細胞質接近無色。

2樓:

羅丹明123染色檢測線粒體膜電位

外觀:紅棕色粉末

化學名:rh123 羅丹明123

別名: rhodamine 123; rh123

分子式:c21h17cln2o3

分子量:380.82

配製:羅丹明123粉劑用甲醇配成1mg/mlde 儲備液,染色時用dpbs緩衝液將其稀釋為所需濃度

儲存:冰箱-20度避光

一、檢測原理:

羅丹明123(rhodamine 123)是一種可透過細胞膜的陽離子熒光染料,是一種線粒體跨膜電位的指示劑。其在正常細胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進入線粒體基質,熒光強度減弱或消失。而在凋亡發生時,線粒體膜完整性破壞,線粒體膜通透性轉運孔開放,引起線粒體跨膜電位(δψm) 的崩潰, rh123 重新釋放出線粒體, 從而發出強黃綠色熒光,可用熒光顯微鏡、熒光光度計或流式細胞儀檢測,通過熒光訊號的強弱來檢測線粒體膜電位的變化和凋亡的發生,可用於培養的細胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。

二、 使用方法:

1.細胞染色及分析

(1)培養細胞1×106/ml重懸於培養基中;

(2)加入羅丹明123染液0.1μg/ml~50 μg/ml (根椐細胞種類不同而濃度不同,一般3~10 μg/ml);

(3)37℃,5% co2細胞培養箱孵育1~30 min(根椐細胞種類不同而不同,一般10 min);

(4)離心以培養基洗細胞兩次;

2. 組織提取的線粒體染色及分析

(1)按常規方法提取的線粒體,用適量的1×assays buffer(將5×assays buffer 用水稀釋5倍)重懸;

(2)常規方法進行蛋白含量測定後,用1×assays buffer調配成3mg/ml的線粒體溶液;

(3)取2ml 1×assays buffer和1ml線粒體溶液;

(4)加入適量待測化合物(同時設空白對照組),250c保溫min;

(5)加入羅丹明123染液10 μl;

(6)熒光光度計檢測:上述混合液全部加入石英比色皿中,置於250c下測定,激發波長488~505nm,發射波長530nm,連續記錄從0 min~30 min內熒光強度的變化。

三、注意事項

1、操作時需戴手套

2、羅丹明123為通透性染料,可以自由進入細胞

3、孵育時,必須避免光照

4、使用時,避免汙染母液

5、染色完成後,即刻進行熒光檢測分析

可以在同一植物細胞中觀察線粒體和葉綠體嗎

可以的。因為植物葉肉細胞中就同時含有葉綠體和線粒體。一樓所說的情況是用光學顯微鏡吧,使用電子顯微鏡的話就可以解決這個問題了。可以啊,用健那綠給活細胞線粒體染色,葉綠體有顏色,不用染 就都看見了 答 可以。解析 植物的葉綠細胞中既含有葉綠體,又含有線粒體。一般不可以,因為線粒體是無色的要用健那綠染色才...

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請問 線粒體與葉綠體的不同。葉綠體和線粒體的區別?

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