1樓：匿名使用者
原理：流式細胞儀可同時進行多引數測量，資訊主要來自特異性熒光訊號及非熒光散射訊號。測量是在測量區進行的，所謂測量區就是照射鐳射束和噴出噴孔的液流束垂直相交點。液流**的單個細胞通過測量區時，受到鐳射照射會向立體角為2π的整個空間散射光線，散射光的波長和入射光的波長相同。
散射光的強度及其空間分佈與細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構密切相關，因為這些生物學引數又和細胞對光線的反射、折射等光學特性有關。未遭受任何損壞的細胞對光線都具有特徵性的散射，因此可利用不同的散射光訊號對不經染色活細胞進行分析和分選。經過固定的和染色處理的細胞由於光學性質的改變，其散射光訊號當然不同於活細胞。
散射光不僅與作為散射中心的細胞的引數相關，還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關。
在流式細胞術測量中，常用的是兩種散射方向的散射光測量：①前向角（即0角）散射（fsc）；②側向散射（ssc），又稱90角散射。這時所說的角度指的是鐳射束照射方向與收集散射光訊號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。
一般說來，前向角散射光的強度與細胞的大小有關，對同種細胞群體隨著細胞截面積的增大而增大；對球形活細胞經實驗表明在小立體角範圍內基本上和截面積大小成線性關係；對於形狀複雜具有取向性的細胞則可能差異很大，尤其需要注意。側向散射光的測量主要用來獲取有關細胞內部精細結構的顆粒性質的有關資訊。側向散射光雖然也與細胞的形狀和大小有關，但它對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感，也能對細胞質內較大顆粒給出靈敏反映。
在實際使用中，儀器首先要對光散射訊號進行測量。當光散射分析與熒光探針聯合使用時，可鑑別出樣品中被染色和未被染色細胞。光散射測量最有效的用途是從非均一的群體中鑑別出某些亞群。
熒光訊號主要包括兩部分：①自發熒光，即不經熒光染色細胞內部的熒光分子經光照射後所發出的熒光；②特徵熒光，即由細胞經染色結合上的熒光染料受光照而發出的熒光，其熒光強度較弱，波長也與照射鐳射不同。自發熒光訊號為噪聲訊號，在多數情況下會干擾對特異熒光訊號的分辨和測量。
在免疫細胞化學等測量中，對於結合水平不高的熒光抗體來說，如何提高訊雜比是個關鍵。一般說來，細胞成分中能夠產生的自發熒光的分子（例核黃素、細胞色素等）的含量越高，自發熒光越強；培養細胞中死細胞/活細胞比例越高，自發熒光越強；細胞樣品中所含亮細胞的比例越高，自發熒光越強。
減少自發熒光干擾、提高訊雜比的主要措施是：①儘量選用較亮的熒光染料；②選用適宜的鐳射和濾片光學系統；③採用電子補償電路，將自發熒光的本底貢獻予以補償。
操作過程：
①開啟電源，對系統進行預熱；
②開啟氣體閾，調節 壓力，獲得適宜的液流速度；開啟光源冷卻系統；
③在樣品管中加入去離子水，沖洗液流的噴嘴系統；
④利用校準標準樣品，調整儀器，使在鐳射功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調定的 基礎上，0和90散射的熒光強度最強，並要求變異係數為最小；
⑤選定流速、測量細胞數、測量引數等，在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品；同時選 擇計算機屏上資料的顯示方式，從而能直觀掌握測量程序；
⑥樣品測量完畢後，再用去離子水沖洗液流系統；
⑦因為實驗資料已存入計算機硬碟（有的機器還備有光碟系統，存貯量更大），因此可關閉 氣體、測量裝置，而單獨使用計算機進行資料處理；
⑧將所需結果列印出來。
2樓：匿名使用者
基本的流程（主要是抗體染色）
基本原理
流式細胞儀檢測的原理
流式細胞術的作用原理
3樓：匿名使用者
流式細胞術（flow cytometry, fcm）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，並能同時從一個細胞中測得多個引數，與傳統的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優點。
將待測細胞染色後製成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷流式細胞術酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區域。
流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。經過聚焦整形後的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在鐳射束的照射下，產生散射光和激發熒光。這兩種訊號同時被前向光電二極體和90°方向的光電倍增管接收。
光散射訊號在前向小角度進行檢測，這種訊號基本上反映了細胞體積的大小；熒光訊號的接受方向與鐳射束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光訊號。
這些熒光訊號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度，經光電倍增管接收後可轉換為電訊號，再通過模/數轉換器，將連續的電訊號轉換為可被計算機識別的數字訊號。計算機把所測量到的各種訊號進行計算機處理，將分析結果顯示在計算機螢幕上，也可以列印出來，還可以資料檔案的形式儲存在硬碟上以備日後的查詢或進一步分析。
檢測資料的顯示視測量引數的不同由多種形式可供選擇。單引數資料以直方圖的形式表達，其x軸為測量強度，y軸為細胞數目。一般來說，流式細胞儀座標軸的解析度有512或1024通道數，這視其模數轉換器的解析度而定。
對於雙引數或多引數資料，既可以單獨顯示每個引數的直方圖，也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體檢視。
細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電後振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現細胞的分離。
流式細胞儀測定細胞週期各時相的原理和基本步驟（不用說具體使用的量）
4樓：匿名使用者
在細胞培養液中加入模擬核苷酸edu （比較老的方法也可以用brdu）。培養一小時 後，更換為正常的培養液繼續培養。模擬核苷酸可以像天然核苷酸一樣被細胞攝取並整合入新合成的dna。
培養一段時間後（一般小於一個細胞週期），固定細胞。根據所使用模擬核苷酸的不同，使用不同的方法。edu，改變緩衝液的ph值，就會發出熒光。
而brdu則需用熒光抗體識別，需要對細胞膜和核膜進行通透處理。
再加入pi對dna染色。
在二維座標圖上，橫座標設為線性pi熒光強度，縱座標設為模擬核苷酸的熒光強度（log）。
典型的圖就像下面一樣：
g1, g2 和s期就按照圖中的劃分來做。g1期的細胞沒有新合成dna，所以brdu訊號是陰性，而pi的訊號位於1倍體期。s期是正在合成dna，所以brdu都是陽性。
g2期是已經合成好了2倍的dna，所以位於2倍體期，訊號是g1期的一倍。這個圖中，g1 pi訊號是300， g2就是600.
用流式細胞儀檢測各個象限的意義我用流式細胞儀檢測了CD4，CD8，圖怎麼看，各象限表示什麼
左上象限為壞死細胞，左下象限為正常細胞，右上象限為早期凋亡細胞，右下象限為晚期凋亡細胞。要看你是什麼染料標記了 例如臨床上，最常用的熒光染料主要有三大種 fitc pe和pecy5。肉眼觀察，fitc為綠色 pe為橙色 pecy5為紅色。它們都在488奈米被激發。檢測波長分別是 fitc是525奈米...
流式細胞儀檢測細胞週期DNA含量結果圖怎樣分析和說明
看你用什麼染色了，如果只是pi的話，見圖1。如果用annexin v fitc和碘化丙啶染色的話，正常的活細胞不被annexin v fitc和碘化丙啶染色 圖2左下角 凋亡早期的細胞僅被annexin v fitc染色，碘化丙啶染色呈陰性 圖2右下角 壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被annexi...
紅色熒光染料pkh26走流式細胞儀的apc嗎
不能。這個熒光染料需要黃綠鐳射來激發 最大激發波長是551nm 最強光譜在567.所以在有黃綠鐳射的機器上，使用pe通道檢測。有人用過pkh26熒光染料嗎 不能。這個熒光染料需要黃綠鐳射來激發 最大激發波長是551nm 最強光譜在567.所以在有黃綠鐳射的機器上，使用pe通道檢測。請問各種染料對應的...