退火溫度低會對PCR產生什麼影響

1樓：網友

退火溫度過低會造成pcr時非特異性帶增多，如果退悄睜孫火溫度低都pcr不出結果，我覺得可能你的體系有問題，或啟鏈者引物有問題，早掘pcr溫度低只是帶比較多，一定會包含目的帶的。

2樓：網友

當然有影響，這種引物溫度差太多的都比較難擴增。

所以建議你提質粒酶切或測序。

3樓：用好五

為什麼用48℃退火呢？還有你的引物退火溫度71℃？你記錯了吧？

你把退火溫度公升到55℃。

pcr退火溫度怎麼確定?

4樓：溫嶼

計算退火溫度的方法：

1.退火溫度＝4×（g＋c）＋2×（a＋t）－（5～8）只是粗算，有時不靈，但比較簡便。

2.用primer5（or oligo6）計算，引物配對好後，primer5可以顯示tm,我認為這個值就是退火溫度，我的經驗再加2 or 3度最好。

3.合成引物的單子上也有個tm,減去5～8也可，但有些公司提供的tm就是方法1計算的。

我認為方法二最準確，不知道還有其他方法嗎？

pcr退火溫度多少合適

5樓：禾鳥

1、退火溫度低於引物tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。

退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的tm值（tm值=4(g+c) +2(a+t)）為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然後在此次實驗基礎上做出預估。退火溫度對pcr的特異性有較大影響。

引物延伸一般在72℃進行（taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生設定為1min/kbp。

擴慧扮展資料

pcr的過程：

1、dna變性：（90℃-96℃）：雙鏈dna模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈dna

2、退火：（60℃-65℃）：系統溫度降低，引物與dna模板結合，形成區域性雙鏈。

3、延伸：（前啟灶70℃-75℃）：在taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dntp為原料，從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸，合成與模板互補的dna鏈。

pcr反應退火溫度的高低與什麼因素有關

6樓：惠企百科

退火溫度是影響pcr反應特異性的重要因素。

引物與模板復性所需要的退火溫度取決於引物的長度、鹼基組成及其濃度。引物長度越短，引物中g+c的含量越低，所需的退火溫度越低。雖然降低退火溫度可能增加擴增產量，但引物與模板間的錯配現象也會增多，導致非特異性擴增上公升。

相反，提高退火溫度雖然可以提高反應的特異性，但會引起擴增效率下降，甚至無擴增產物出現。引物的退火溫度可以通過tm=4(g+c)+2(a+t)公式組略估算，一般在算出的tm值上減去5攝氏度極為較合適反應設計退火溫度。

pcr中,退火是什麼意思

7樓：惠企百科

退火，即復性，是恢復原有性質的意思。變性的生物大分子恢復成具有生物活性的天然構象的現象。

蛋白質或核酸的天然構象，在分子遭到變性以後，全部或部分恢復。它通常是特指分子生物學中一類生物大分子物質，尤指脫氧核糖核酸(dna)和核糖核酸(rna)。

dna分子受熱變性，雙鏈分開，若再緩慢冷卻至室溫，則在260nm處吸光度降到變性前的值，這一過程稱為「退火」。經退火處理，可使變性dna的兩條多核苷酸鏈重新聚合成雙鏈螺旋結構，恢復其本來的理化性質和生物學功能。