1樓:網友
半定量?? 就是膠圖嘍?? 這還要有步驟??
半定量rt-pcr和定量rt-pcr的區別
2樓:陳災災
半定量rt-pcr與定量rt-pcr的區別是半定量rt-pcr操作簡便,可快速推測樣品中特異mrna的相對數量;而定量rt-pcb可即時定量,較半定rt-pcb更準確。
半定量反轉錄-聚合酶鏈反應(semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,sqrt-pcr)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法,通過mrna反轉錄成cdna,再進行pcr擴增,並測定pcr產物的數量,可以推測樣品中特異mrna的相對數量。
定量rt-pcr(quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,qrt-pcr)是在用一步法或兩步法,在pcr反應體系中加入螢光基團,利用螢光訊號積累即時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
3樓:柏公尺
半定量rt-pcr一般是在沒有條件做 即時pcr 的情況下使用,用於測定體內目的基因的表達增加減少與否,即通過目的基因跑出來的電泳帶與管家基因(如β-actin)的電泳帶的相對含量比較,觀測目的基因表達增減,另外還要做乙個β-actin的內參照對照。
管家蛋白基因就是細胞內一些表達比較穩定的基因,如β-actin在各種細胞內的含量都穩定在10%左右。因此研究的目的基因的表達量與這些比較恆定含量的基因一比較,就可以觀察到目的基因是否隨著時間改變了~~~
半定量rt-pcr和定量rt-pcr的區別
4樓:郗晚竹長衣
半定量rt-pcr參照的做法一般有兩種:
1)將要比較的兩個樣品的beta-actin
調成一樣的亮度,然後就可以直接比較目的基因的亮度了。方法的結果比較直觀,但較費事。
2)不進行調平,乙個樣品裡將目的基因和beta-actin直接比較,用軟體就可以做到,然後將不同樣品的這個比值進行比較就可以了。方法比較簡單,但結果不夠直觀。
1.每個標本都要做自己的內參,不能用同乙個內參!
2.每個標本在實際做前都要摸最佳迴圈數,包括內參,但內參的迴圈數不一定要和目的基因一樣,都要選擇上公升期的中間數作為最佳迴圈數,否則進入平臺期就沒有可比性了!所以內參要有它自己的最佳迴圈數!
3.電泳掃瞄後,計算灰度值,先用同一標本的內參和目的進行比較,然後用這個相對值再去和其他你所要比較的平行組進行比較,一般每組4個樣本以上。這樣就可以知道各組之間的差別了!
請問半定量pcr的原理和介紹,請教半定量pcr的原理及介紹
樓上的回答的蠻好的,我建議還可以使用一些分析軟體對電泳後的結果進行分析,可以得到一個相對量化的結果。我知道的軟體有quantity one 好像是這麼個名字吧 半定量反轉錄 聚合酶鏈反應 semi quantitative reverse transcription and polymerase c...
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