1樓：
樓上的回答的蠻好的，我建議還可以使用一些分析軟體對電泳後的結果進行分析，可以得到一個相對量化的結果。我知道的軟體有quantity one（好像是這麼個名字吧）
2樓：
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術，較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關係和良好的重複性。
步驟：1.抽提rna，2.反轉錄獲得cdna，3.以cdna為模板做pcr
注意：步驟1，rna抽提質量一定要好，注意汙染。內參的選擇，常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3，半定量rt-pcr應該再兩管中進行，既內參和目的基因各一管，這樣便於控制，做圖的時候可以放在一各泳道里跑！指數期和平臺期一定要摸清楚！
請教半定量pcr的原理及介紹
3樓：
rt-pcr將以rna為模板的cdna合成同pcr結合在一起，提供了一種分析基因表達的快速靈敏的方法。rt-pcr用於對錶達資訊進行檢測或定量。另外，這項技術還可以用來檢測基因表達差異或不必構建cdna文庫克隆cdna。
rt-pcr比其他包括northern印跡、rnase保護分析、原位雜交及s1核酸酶分析在內的rna分析技術，更靈敏，更易於操作。
rt-pcr的模板可以為總rna或poly(a)+選擇性rna。逆轉錄反應可以使用逆轉錄酶，以隨機引物、oligo(dt)或基因特異性的引物（gsp）起始。rt-pcr可以一步法或兩步法的形式進行。
在兩步法rt-pcr中，每一步都在最佳條件下進行。cdna的合成首先在逆轉錄緩衝液中進行，然後取出1/10的反應產物進行pcr。在一步法rt-pcr中，逆轉錄和pcr在同時為逆轉錄和pcr優化的條件下，在一隻管中順次進行。
實驗步驟：
trizol法rna提取步驟
1、提取總rna
2、逆轉錄反應
3、pcr反應
4樓：鳳淳雅酈美
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative
reverse
transcription
andpolymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術，較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關係和良好的重複性。
步驟：1.抽提rna，2.反轉錄獲得cdna，3.以cdna為模板做pcr
注意：步驟1，rna抽提質量一定要好，注意汙染。內參的選擇，常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3，半定量rt-pcr應該再兩管中進行，既內參和目的基因各一管，這樣便於控制，做圖的時候可以放在一各泳道里跑！指數期和平臺期一定要摸清楚！
簡述定量pcr的原理和過程
5樓：世玉枝裘婷
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative
reverse
transcription
andpolymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術，較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關係和良好的重複性。
步驟：1.抽提rna，2.反轉錄獲得cdna，3.以cdna為模板做pcr
注意：步驟1，rna抽提質量一定要好，注意汙染。內參的選擇，常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3，半定量rt-pcr應該再兩管中進行，既內參和目的基因各一管，這樣便於控制，做圖的時候可以放在一各泳道里跑！指數期和平臺期一定要摸清楚！
6樓：井永芬暴茶
原理1;在含有插入性染料或特異性探針的體系中擴增目標序列.
2光學系統激發並檢測報告熒光
3報告熒光的強度與所擴增dna的量呈比例關係過程和普通pcr差不多，不過引物設計比較複雜，使用的儀器也不一樣，在對數期檢測。
7樓：管景明樸賦
過程其實和普通pcr一樣，只是定量一般會加熒光染料（或熒光探針），整個過程是被儀器監控的所以能夠實時的知道擴增的進度。最後根據標準曲線來定量的。
什麼是半定量 rt- pcr
8樓：犁半梅滕馳
望採納，因此半定量pcr時需要設定對照組。
4.保證反轉錄的效率。
5.rt-pcr需要做幾個重複孔，避免加樣的誤差。
6.所用的內參是否合適。
3，有什麼問題互相交流總結我所做的rt-pcr的經驗，提高半定量rt-pcr的可靠性或重複性需要注意的幾點.
提取rna前確保樣品的正確儲存，不能有降解。
2.提高rna的過程中避免rna酶的汙染引起rna部分降解.
提取的rna需要保證無基因組dna的汙染，因為管家基因的表達量只是相對保守，但視不同的處理方式會有變化。
希望能幫到你：1
9樓：柏米
半定量rt-pcr一般是在沒有條件做 實時pcr 的情況下使用，用於測定體內目的基因的表達增加減少與否，即通過目的基因跑出來的電泳帶與管家基因（如β-actin）的電泳帶的相對含量比較，觀測目的基因表達增減，另外還要做一個β-actin的內參照對照。
管家蛋白基因就是細胞內一些表達比較穩定的基因，如β-actin在各種細胞內的含量都穩定在10%左右。因此研究的目的基因的表達量與這些比較恆定含量的基因一比較，就可以觀察到目的基因是否隨著時間改變了~~~
半定量pcr原理 mrna表達量水平
10樓：
半定量rt-pcr是通過rt-pcr最終產物電泳後電泳條帶的明暗來間接反應出原始模板的丰度.熒光定量pcr因為是全程監控pcr擴增的變化,並且能夠同管家基因的擴增曲線進行相對定量,而將基因的表達量數值化,準確度高於半定量rt-pcr.半定量rt-pcr因為是監控的最終產物,而在基因表達水平很高的時候,pcr體系很可能在反應中後期就飽和了,所以對於高水平表達的基因來說,用半定量rt-pcr並不能很準確的說明問題.
11樓：匿名使用者
半定量rt-pcr與定量rt-pcr的區別是半定量rt-pcr操作簡便，可快速推測樣品中特異mrna的相對數量；而定量rt-pcb可實時定量，較半定rt-pcb更準確。半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。定量rt-pcr（quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,qrt-pcr）是在用一步法或兩步法，在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
半定量rt-pcr需要跑電泳，根據條帶亮度的強弱來判斷模板拷貝數的高低或者是表達量的高低，而定量rt-pcr則無需電泳可以實時監測整個pcr的全程並且由給出的ct值及standard curve來判斷gene拷貝數的高低。
半定量pcr和熒光定量pcr有什麼不同
12樓：艾康生物
你好！半定
量pcr也是部分定量pcr，是因為組織取材不同才叫做半定量和定量pcr。如果不能將組織中的dna濃度準確的測定出來，（咽拭子、痰等取材因為無法精確到每毫升，或者取材後無法確保每次取材都能得到同樣的結果，每毫升病毒數量不同，因此無法進行定量。而血液中的病毒因為流動和稀釋作用可以精確到每毫升多少copies，因此叫做定量pcr）。
熒光pcr是兩個探針帶熒光，在pcr過程中不斷合成目的片段從而發出熒光。熒光定量pcr也可以進行半定量。
熒光定量pcr的原理,熒光定量PCR的原理
pcr擴增時在加入一對引復物的同時制加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收 剛開始時,探針結合在dna任意一條單鏈上 pcr擴增時,tap酶的5 端 3 端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團...
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