1樓：網友
親和層析法。
親和層析是利用待分離物質和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術。
具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、dna與互補dna或rna、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等。可親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當含有混合組份的樣品通過此固定相時，只有和固定相分子有特異親和力的物質，才能被固定相吸附結合，其它沒有親和力的無關組份就隨流動相流出，然後改變流動組成份，將結合的親和物洗脫下來。
親和層析中所用的載體稱為基質，與基質共價連線的化合物稱配基。
親和層析純化過程簡單、迅速，且分離效率高。對分離含量極少又不穩定的活性物質尤為有效。但本法必須針對某一分離物件，製備專一的配基和尋求層析的穩定條件，因此親和層析的應用範圍受到了一定的限制。
親和層析可用於純化生物大分子：稀溶液的濃縮；不穩定蛋白質的貯藏；從純化的分子中除去殘餘的汙染物；用免疫吸附劑吸附純化對此尚無互補配體的生物大分子；分離核酸是親和層析應用的乙個重要方面。
瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的，是由半乳糖和脫水-l- 半乳糖相互結合的鏈狀多糖。含硫酸根比瓊脂少，因而分離效果明顯提高。
2樓：網友
這是一種利用蛋白質分子對其配體分子特有的識別能力而建立的一種分離純化方式。
1、把待純化的某一蛋白質的特異配體共價連線到瓊脂糖凝膠載體表面的功能基上。
2、在多糖載體和配體之間加乙個連線臂，消除載體表面位阻。
3、蛋白質混合物加到層析柱後，目標蛋白質與配體結合，雜蛋白不能結合可被洗滌除去。
4、結合的蛋白可用含遊離的相應配體溶液從柱上洗脫下來。
親和層析的原理介紹
3樓：刃
親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應的抗體（或抗原）發生特異性結合，而這種結合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化後，就可以使存在液相中的相應抗體（或抗原）選擇性地結合在固相載體上，藉以與液相中的其他蛋白質分開，達到分離提純的目的。
此法具有高效、快速、簡便等優點。
親和層析的操作步驟？
4樓：網友
實驗方法。
1．瓊脂糖活化。
取20ml sepharose 4b放在布氏漏斗中抽乾，加少量的 ph nahco3液洗滌，立即轉入100ml燒杯中，冰浴置於磁力攪拌器上。
在通風櫥內稱取2g溴化氰，加水20ml溶解，然後倒入瓊脂糖中，小心滴加2mol/l naoh,使ph保持在11左右，反應10min。在1min~2min迅速調整ph為維持10min。
將活化的瓊脂糖迅速倒入布氏漏斗中，以冰水抽洗成中性，再迅速以250ml冷的 ph nahco3抽洗。
2．偶聯蛋白 20ml 4b液體相當於一半的固相載體。
事先將需偶聯的抗原（或抗體）蛋白200mg置於 ph nahco3液中透析數小時(一般偶聯量為10~30mg/g載體)。
將活化的瓊脂糖迅速倒入蛋白液中（在內，從抽洗到偶聯），4℃緩慢攪拌過夜，使蛋白與活化的瓊脂結合。
3．裝柱。 選柱：不宜過大，一般以的層析柱可裝偶聯蛋白的瓊脂糖約30ml。
裝柱：將已與蛋白偶聯的瓊脂糖裝入層析柱內，擰緊下口夾，讓其下沉，數分鐘後鬆開下口夾，使溶液約以1ml/min的速度流出。
洗柱：以 ph nahco3（含 nacl）洗滌至洗出液的od280＜為止。
收集全部的洗脫液，測得的od280值×洗脫液的總ml數即為未偶聯蛋白的含量，由此可計算偶聯率。
4．吸附與解吸附。
按床體積1/10加樣，濃度為1％～2%，緩慢加入待純化的抗體（或抗原），用 液洗脫，流速為1ml/min，至洗出液od280＜為止。
加 甘氨酸－hcl緩衝液，流速1ml/min，收集解吸附下來的成分，立即以1mol/l nahco3中和，以免蛋白變性。
5．以兩倍體積的7mol/l尿素洗滌，再用 ph 液或生理鹽水洗滌，平衡後，可繼續使用。儲存可加入 n3於4℃儲存。防止冷凍和乾裂。
6．結果判定。
對解吸附下來的蛋白以圓盤電泳或雙相瓊脂糖電泳進行純度鑑定。
將純度好的各管洗脫液合併，以生理鹽水透析，然後濃縮或凍幹儲存。
親和層析的介紹
5樓：創未組
將具有特殊結構的親和分子製成固相吸附劑放置在層析柱中，當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時，與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由於不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質分開，然後選用適當的洗脫液， 改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來，這種分離純化蛋白質的方法稱為親和層析。 利用共價連線有特異配體的層析介質分離蛋白質混合物中能特異結合配體的目的蛋白或其它分子的層析技術。
親和層析的載體要求
6樓：汽子喱不象
理想的載體應具有下列基本條件：①不溶於水，但高度親水；埋兄頃②惰性物質，非特異性吸附少；③具有相當量的化學基團可供活化；④理化性質穩定；⑤機械效能好，具有一定的顆粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最彎陸好為多孔的網狀結構，使大分子能自由通過；⑦能抵抗微生物和醇的作用。
可以做為固相載體的有皂土、玻璃微球、石英微球、羥磷酸鈣、氧化鋁、聚丙烯醯胺凝膠、澱粉凝膠、葡聚糖凝膠、纖維素和瓊脂糖。在這些載體中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特異塵緩性吸附。纖維素的非特異性吸附強。
聚丙烯醯胺凝膠是優良載體。
瓊脂糖凝膠的優點是親水性強，理化性質穩定，不受細菌和酶的作用，具有疏鬆的網狀結構，在緩衝液離子濃度大於時，對蛋白質幾乎沒有非特異性吸附。瓊脂糖凝膠極易被溴化氫活化，活化後性質穩定，能經受層析的各種條件，如 naoh或1mol/l hcl處理2h~3h及蛋白質變性劑7mol/l尿素或6mol/l鹽酸胍處理，不引起性質改變，故易於再生和反覆使用。
瓊脂糖凝膠微球的商品名為sepharose，含糖濃度為%時分別稱為2b、4b、6b。因為sepharose 4b的結構比6b疏鬆，而吸附容量比2b大，所以4b應用最廣。
親和層析的原理 最好詳細些
7樓：tiffany家的
4 親和層析。
原理 親和層析是應用生物高分子與配基可逆結合的原理，將配基通過共價鍵牢固結合於載體上而製得的層析系統。這種可逆結合的作用主要是靠生物高分子對它的配基的空間結構的識別。常用的生物親和關係有酶-底物、底物類似物、抑制劑、啟用劑、輔因子，抗體-抗原，激素-受體蛋白、載體蛋白，外源凝集素-多糖、糖蛋白、細胞表面受體，核酸-互補核苷酸序列、組蛋白、核酸結合蛋白等 〔10，11〕 。
離子交換劑 親和層析的層析劑可分為3個部分：
1）載體，載體起支架作用，一般是偶聯凝膠或多孔玻璃珠。
2）間臂，由於生物大分子的空間位阻作用，需加一間臂，其長度具有重要作用。太長則增加了非特異性疏水吸附作用，太短則起不到應有的作用。
3）配基，這是親和層析的核心物質，在分離中起特異性吸附欲分離物的作用。配基一般分為天然配基（包括糖結合配基和蛋白質結合配基）、染料配基、氨基酸類親和配基、核苷酸及核苷酸類似物配基和仿生配基等幾類。其中利用計算機輔助設計的仿生配基 〔12～15〕 和膜層析 〔16〕 代表了親和層析的發展方向。
不僅是配基本身的結構，它們與載體的連線方法也與層析的分離能力有關 〔17〕 。
影響因素與洗脫 親和層析中配基與欲分離物吸附作用的大小主要與配基的空間結構有關，因此可以用分子間相互作用的平衡常數k d 來衡量親和作用強度 〔18〕 。但它們的結合力仍不外乎對應的功能基團之間的氫鍵、靜電作用、疏水作用等。所以，除了可改變配基以改變親和層析的作用強度以外，還可以通過改變ph和離子強度的方法來改變配基與生物大分子之間的親和力，從而達到洗脫的目的 〔19〕 。
但由於親和層析的多樣性，洗脫的條件常常需要通過實驗來獲得。除此以外，還可運用其它配基、抑制劑等物質與出層析劑上的配基或生物大分子產生競爭性結合，達到洗脫的目的，這種方法被稱為專一性洗脫。專一性洗脫可以獲得很高的分辨能力，但洗脫劑的**較高，所以常與普通洗脫配合使用。
值得注意的是，在洗脫時，會有少許配基與蛋白質一同被洗脫下來，因此常在其後加一凝膠層析以除去小分子的配基。
應用及舉例 在實際使用中，配基與欲分離蛋白質之間的親和力要控制在一定的範圍之內，這是因為若親和力太低，則分離的效果不好；若親和力太高，則洗脫太困難。因此配基與欲分離蛋白質之間的k d 值一般控制在10 -4 ～10 -6 之間。
8樓：辛德林記
affinity chromospectrum
利用眾多被分離物與分離介質間的分子間相互親和力的不同來分離物質。
本質是利用了電磁力。
請問親和層析原理是什麼
9樓：瓶厲身
生物分子間存在很多特異性的相互作用，它們之間都能夠專一而可逆的結合，這種結合力就稱為親和力。親和層析就是通過將緩行具有親和力的兩個分子中乙個固 定在不溶性基質氏哪鍵上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另乙個分子進行分殲巧離純化。
瓊脂糖凝膠電泳操作應注意哪些環節
用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品，如大分子核酸 病毒等，一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見為題都有哪些？dna帶模糊 dna降解 瓊脂糖凝膠電泳試驗中要避免核酸酶汙染 電泳緩衝液陳舊 電泳緩衝液多系使用後，離子強度降解，ph值上升，緩衝能力減弱...
總結比較醋酸纖維薄膜電泳,瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯醯胺凝膠電泳
dna電泳一般使用的都是瓊脂糖凝膠電泳,電泳的驅動力靠dna骨架本身的負電荷.蛋白質電泳 一般指sds page 一般使用的都是聚丙烯醯胺凝膠電泳,電泳的驅動力靠與蛋白質結合的sds上所攜帶的負電荷.所以相同點就是樣品都是帶負電荷的,從負極向正極移動,移動的距離都和樣品的分子量有關.而且這兩個電泳體...
瓊脂糖凝膠電泳的電壓設定成多少好？高了有什麼壞處嗎
首先要知道電壓高低對跑膠的影響，才能決定快慢嘛 電壓高低是相對的，膠才是本質，電壓過高會因為發熱導致膠融化，跑太長時間marker會跑出去，甚至汙染電解液 如果電壓相同，你配0.8 的膠肯定比配1.2 要跑的快嘛 還有就是用途了，是分離樣品還是就觀察條帶，後者就可以跑快點嘛，有沒有東西一看就知道了 ...