PCR擴增技術的引物是什麼?怎麼得到的?

2023-02-12 13:45:15 字數 2383 閱讀 2532

1樓:天藍色心

在細胞內,dna複製的引物是rna,因為存在引物酶催化其合成,新鏈合成後又有dna聚合酶i對其進行5』端外切和填補,最後由dna連線酶縫合相鄰岡崎片段。因為是已知序列的核甘酸序列,所以可以人工合成得到。

利用pcr技術擴增目的基因,引物是什麼?引物是什麼

2樓:匿名使用者

引物是人工設計合成的一對(兩個)小片段dna,具有和目的基因兩端互補的序列和人工設計的酶切位點,用於定位複製的起始位置和後續連線操作。

3樓:匿名使用者

引領dna單鏈結合互補。

pcr擴增技術中的引物是不是就是四種脫癢核甘酸

4樓:匿名使用者

一般以dna為模板做pcr,引物,自然是dna中的4種核苷酸,但是要用引物設計軟體(primer p 5,第二個字母忘記怎麼寫了。。=設計,符合引物設計原則,然後用於實驗擴增。

5樓:挑逗你神經丶

pcr擴增引物是寡聚核糖核苷酸,需要設計。

pcr的技術的主要步驟及pcr引物設計的一般原則有哪些

6樓:網友

pcr的技術的主要步驟及pcr引物設計的一般原則分述如下:

pcr的技術的主要步驟:

1、dna變性:(90℃-96℃):雙鏈dna模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈dna。

2、退火:(60℃-65℃):系統溫度降低,引物與dna模板結合,形成區域性雙鏈。

3、延伸:(70℃-75℃):在taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dntp為原料,從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸,合成與模板互補的dna鏈。

每一迴圈經過變性、退火和延伸,dna含量即增加一倍。現在有些pcr因為擴增區很短,即使taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內複製完成,因此可以改為兩步法,即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行,以減少一次升降溫過程,提高了反應速度。

2、引物設計的基本原則。

1、引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。

2、引物鹼基:g+c含量以40-60%為宜,g+c太少擴增效果不佳,g+c 過多易出現非特異條帶。atgc最好隨機分佈,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。

3、引物內部不應出現互補序列。

4、兩個引物之間不應存在互補序列,尤其是避免3 ′端的互補重疊。

5、引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續8個鹼基在待擴增區以外不能有完全互補序列,否則易導致非特異性擴增。

6、引物3『端的鹼基,特別是最末及倒數第二個鹼基,應嚴格要求配對,最佳選擇是g和c。

7、引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點,引入突變位點,用生物素、熒光物質、地高辛標記,加入其它短序列,包括起始密碼子、終止密碼子等。

pcr擴增時為什麼需要引物呢?

7樓:

這個是dna聚合酶的特性決定的。dna聚合酶要延伸dna連,必須要有一個3`端的羥基,沒有這個結構,dna聚合酶無法合成dna。

引物的作用,就是和dna模板連特異性結合,為dna聚合酶提供3`端羥基。使得pcr繼續。

引物是一段單鏈的dna。不是rna。

8樓:叮叮貓

因為dna聚合時需要3『oh,這個只能由引物提供(沒原因,就因為是那樣)。這個引物是一小段rna ,引物絕對是rna,而不是dna。看看dna複製需要什麼酶就知道了,需要依賴dna的rna聚合酶(ddrp)如果是dna,那麼複製的時候要引物幹什麼呢?

我直接用互補脫氧核糖核酸就完了,幹嘛還弄一引物,然後複製完再水解掉?本人生化學的還是不錯的,別人都說難,我也不覺得。

pcr擴增對引物有什麼要求?為什麼

9樓:匿名使用者

1,這是由dna聚合酶決定的。dna聚合酶只能在具有前端片段的情況之下,才能夠順著這個片段合成下去。所以一定要有引物作為dna聚合酶的引導片斷。

2。引物結合在dna的什麼位置決定了要擴增的部分。因此引物根據雙鏈互補的原則設計出來,從而確定dna擴增的區域。

什麼是pcr擴增技術

請問在ncbi上blast的時候,需要去除pcr擴增引物序列嗎?

10樓:網友

什麼跟什麼 說的太不清楚餓了 只要你需要的那段序列是對的不就行了嘛 跟引物序列有啥關係 畢竟大部分的pcr引物設計都是在需要的序列兩端隔一段距離 而且如果你測序是拿pcr引物測的話 那前面的幾十個鹼基都是測不準的。

高中生物pcr技術擴增的是兩引物之間的核苷酸序列是什麼意思

pcr技術中引物是什麼?有什麼作用?引物需要複製嗎

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pcr擴增技術獲取目的基因的原理是

pcr技術的基本原理 類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端版互補的寡核苷酸引物。pcr由變性權 退火 延伸三個基本反應步驟構成 模板dna的變性 模板dna經加熱至93 左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作...

生物疑問利用PCR技術擴增含目的基因的DNA分子來形成目的基因,需要3步 為什麼?過程是什麼

pcr技術copy過程簡介 1.將目的基因與引物,以及耐高溫的dna聚合酶加入pcr擴增儀中。加熱到90 95 讓目的基因解旋。2.降溫至55 60 讓引物與 中的dna單鏈結合。3.加熱至70 75 讓耐高溫的dna聚合酶工作,大量擴增目的基因。利用pcr技術擴增目的基因,為什麼是三次 pcr擴增...