1樓:匿名使用者
所謂融合基因,是指將兩個或多個基因的編碼區首尾相連,置於同一套調控序列(包括啟動子、增強子、核糖體結合序列、終止子等)控制之下,構成的嵌合基因.融合基因的表達產物為融合蛋白。
如何構建一個基因的過表達載體
2樓:風翼殘念
當拿到一個基因的dn**段後,就需要把它匯入一個載體,一方面長期儲存。另一方面也需要以載體為媒介將基因匯入受體細胞中。基因表達載體的構建是基因工程的核心。
常用的載體有細菌質粒,噬菌體和動植物病毒。其中質粒載體最常用。所謂載就是一個很長的環狀dna,攜帶一些基因,可以匯入細菌中自我複製,也可以從細菌中提取出來改造。
現在我們就需要把sun片段連到一個載體,用vectornti開啟,研究一下用哪個酶處理,這個載體需要用**a1這個酶切開,然後用sun連上,替換切下來的ccdb,這裡要用到兩個酶,一個**a1限制性內切酶切開,一個dna連線酶把新片段連上,植物轉基因載體和這些酶都是非常常用的試劑。
載體構建好之後需要把它們匯入大腸桿菌中複製,這裡就要用到大腸桿菌的感受態了,十把構建好的載體和感受態混合,然後放到42度熱水處理個1分鐘,再冰上放個3分鐘。
這時需要一些培養細菌的培養基來培養菌們,大腸桿菌這種菌很好養活,唯一需要注意的是,滅菌過後的培養基要小心儲存。把在冰上處理過的大腸桿菌放到培養基中培養一天,為了防止沒有轉入載體的菌也混進來,我們在載體上加入了一個抵抗抗生素的基因。
這樣我們在培養基中加入這種抗生素,在裡面就只有需要的大腸桿菌能生長了。最後得到了上億個攜帶著含有我們的sun基因的載體的大腸桿菌,這時就需要把質粒再提出來。
實驗室裡提質粒需要用專門的試劑盒,也可以簡化一下,先把菌液離心讓菌沉澱,然後再用水把菌打散,然後煮沸1分鐘再離心,取上清,上清中加乙醇讓dna析出,再離心讓dna沉澱,最後用水把dna溶解。這樣提出來的dna會有很多雜質以及細菌的基因組dna。
3樓:匿名使用者
用限制酶分別切割目的基因兩側及運載體,然後在dna連線酶的作用下就形成了基因表達載體。
4樓:紫耀星之軌跡
首先要用一定的限制酶切割質粒,使質粒出現一個缺口,露出黏性末端。然後用同
一種限制酶切斷目的基因,使其產生相同的黏性末端(部分限制性內切酶可切割出平末端,擁有相同效果)。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處,首先鹼基互補配對結合,兩個黏性末端吻合在一起,鹼基之間形成氫鍵,再加入適量dna連線酶,催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵,從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來,形成一個重組dna分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒dna分子結合,形成重組dna分子(也叫重組質粒)的。
怎樣構建目的基因表達載體
5樓:句月聽風
先看錶達載體有哪些合適的酶切位點,比如ndei,ncoi這樣識別序列有atg起始密碼子的,再看看目的基因含不含有這些位點,含有就不好連線了,挑好位點,計算下讀碼框是否正確,保證核糖體結合位點後的第一個atg與目的基因是間隔3的倍數個鹼基。下游的位點更好選,如果有6xhis標籤,想融合表達的話,就注意下要是同一讀碼框,同時利用載體的終止密碼子,如果沒有這樣的需要,就利用目的基因本身的終止密碼子好了。基本是這樣,具體還是看看書吧。
基因表達載體的構建方法是一致的
6樓:為水情狂
基因表達載體的構建 是將目的基因與運載體結合的過程
將目的基因構建在表達載體上的方法有哪些
7樓:匿名使用者
有兩種常用的方法。第一種是直接將pcr擴增的基因片段酶切,然後連線到酶切過的表達載體上。第二種是先把pcr產物連到過度載體上,再從過度載體搶切下目的基因,最後再連線到酶切過的表達載體上。
什麼是融合表達載體
8樓:匿名使用者
是指能與外源基因(目的基因)在體外重組,並能匯入在表達系統中進行高效表達的一類物質。
9樓:張建明哥
融合載體是指 動物或者是植物的細胞 經過某種培養 經過酶的作用 使其細胞相融合 構成的新細胞 這就是融合載體 其中涉及到植物細胞培養 或者是動物細胞培養技術
在構建基因表達載體時候，怎麼利用選擇培養基鑑別是質粒 質粒
先利用選擇培養基篩選有抗性標籤質粒的，挑選做pcr驗證和酶切驗證目的片段 根據所學內容回答下列問題 1 在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割 為了避免目的 1 在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割 為了避免目的基因和載體在酶切後產生的末端發生任意連線，一般選用兩種限制...
關於基因表達載體，關於基因表達載體的構建
基因工程的目的就是要讓一種生物的基因能夠在另外一種生物體內表達，所謂的表達就是要合成蛋白質，所以目的基因要在受體細胞中轉錄成mrna,再由mrna翻譯出蛋白質來。啟動子的作用就是啟動轉錄過程。你應該知道基因的表達是有選擇性的，比如胰島素基因只在胰島b細胞中表達，基因之所以只在特定細胞中表達就是由基因...
怎麼用PS的方法把物體融合到另外物體上去，比如我要將人臉，融合到向
兩個人分別放兩層,想要誰的臉就把誰的臉放在上邊一層,透明度降低,使它可以看見原來的 用歷史畫筆工具擦除這張臉周圍的區域,注意的是別把下邊的臉所以的地方給擦到了,否則前功盡棄 一 我bai說個大概思du 路吧,先把要要換的臉部扣zhi出來,又貼到另張圖dao片版上面,調好位置,比例,又就做皮權膚色處理...