1樓:帳號已登出
質粒易分離。微量取液器(20μl,200μl,1000μl),臺式高速離心機,恆溫振盪搖床,高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋),渦旋振盪器,電泳儀,瓊脂糖平板電泳裝置和恆溫水浴鍋等。
lb液體培養基(luria-bertani):稱取蛋白腖(tryptone)10g,酵母提取物(yeastextract)5g,nacl10g,溶於800ml去離子水中,用naoh調ph至,加去離子水至總體積1公升,高壓下蒸氣滅菌20分鐘。
實驗原理提取質粒dna的方法有很多種,從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取,從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取,從具體操作方法分滾旅虧可以大神分為鹼裂解法、煮沸法、牙籤法等,各種不同的方法各有其優缺點,根據不同的實驗目的可鎮慶以採用合適的提取方法。
2樓:金牆刺紗腰
不容易分離。從細菌中分離質粒dna的方法都包括3個基本步驟:培養細菌使質粒擴增;收集和裂解細胞;分離和純化質粒dna。
採用強鹼液、加熱或溶菌酶(主要針對革蘭氏陽性細菌)可以破壞菌體細胞壁,十二烷基磺酸鈉(sds)和tritonx-100(一般很少使用)可使細胞膜裂解。經溶菌酶和sds或triton x-100處理後,細菌染色體dna會纏繞附著在細胞碎片上,同時由於細菌染色體dna比質粒大得多,易受機械力和核酸掘桐酶等的作用而被切斷成不同大小的慎咐線性片段。
注意:提取判孝坦質粒dna的方法有很多種,從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取,從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取,從具體操作方法分可以分為鹼裂解法、煮沸法、牙籤法等,各種不同的方法各有其優缺點,根據不同的實驗目的可以採用合適的提取方法。詳細內容請參考《分子轉殖實驗指南》。
質粒分離提取的主要原則有哪些?
3樓:帳號已登出
實驗操作中,我們通常應用溶菌酶。
和陰離子表面按活性劑sds(十二烷基磺酸鈉。
來處理收集到的菌體。在溶菌酶的作用下,細菌的細胞壁。
破裂並釋放出質粒。在這個狹窄的範圍內,線性染色體dna的雙螺旋會解開,質粒dna的氫鍵也會斷裂。然而,質粒dna的氫鍵雖然斷裂,但兩條鏈依然互補纏繞,緊密結合。
在裂解過程中,細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體dna會相互纏繞成大型復手好合物,sds可包被在這些大型複合物表面上。當加入乙酸甲使溶液恢復中性時,兩種dna均可迅速復性,但是復性的精準度有所差別:cccdna由於互補鏈在形體上始終保持在一起,復性迅速而準確。
隨機斷裂的線性dna彼此分離,復性既不迅速也不準確,會聚整合網狀結構。通過離心,染色體dna會與細胞碎片一起被沉澱下來,而質粒dna會留在上清液中。再用異丙醇。
或乙醇洗滌,會得到比較純的質粒dna。
質粒提取與純化 操作指南。
質粒的提取和純化主要包含三個步驟:①培養凳物細菌,擴增質粒;②收集並裂解細菌;③分離並純化質粒。目前,試劑棗薯液廠商已經開發出多種多樣的商品化dna提取試劑盒,這些試劑盒中幾乎都包含三種基本的溶液:
溶液ⅰ(葡萄糖。
tris·cl(ph 溶液ⅱ(naoh,1%sds)和溶液ⅲ(kac、冰醋酸。
ddh2o),這三種溶液分別起到懸浮菌體、破碎細胞以及中和的作用。實驗中一般會使用異丙醇沉澱質粒,70%的乙醇洗滌質粒。提取好的質粒的可以儲存在含有rna酶的te緩衝液。中。
4樓:張豫宛愚頑
距離分列提取的主要原則是保證治理之間的互不滲透原則。
5樓:職場達人木子
智力分離的提取主要原則是根據過濾。溶質和溶液分離不相容。
6樓:胡椒玉公尺片
智力分離提取的主要原則由哪些主要原則有好幾點,所以你還是到相關的書上面去找一下比較正確的答案。
葉綠體色素的提取和分離實驗1在葉綠體色素的提取和
1 教bai材中葉綠體中色素提取du 與分離的 zhi實驗所採用的方法是通過層析dao液在濾紙上專擴散而對屬色素進行層析分離,所以叫紙層析法.2 使用同一濾液其他同學實驗成功,而某同學濾紙條上無色素分帶現象,可見該同學失敗的原因不在層析液,其主要原因是層析時濾紙條上濾液細線浸入到層析液,而使大量的色...
在葉綠體的色素提取和分離實驗中,實驗結果表明,在濾紙條上相鄰
葉黃素和胡bai蘿蔔素du 從上到下四個色素一次zhi 是 胡 黃 a b 胡擴散的最dao快 而題版目中所說為相權 鄰色素帶 距離最大 所以是葉黃素和胡蘿蔔素 而不是一樓的答案。這個實驗我們做過,好像是葉綠素b跟胡蘿蔔素 在葉綠體的色素提取和分離實驗中,實驗結果表明,在濾紙條上相鄰色素帶之間距離最...
黃連中小檗鹼的提取分離及檢識實驗結果失敗原因
我可以給您提供一些可能導致實驗結果失敗的原因 .實驗條件不當 實驗條件包括溫耐友度 ph值 溶劑等,如果這些條件不合適,可能會影響黃連中小檗鹼的提取分餘嫌離及檢識實驗結果。.樣品質量問題 如果樣品質量不好,可能會影響實驗結果。比如,樣品中雜質太多 含量太低等。.操作不當 實驗操作過程中,如果操作不當...