酶免疫技術中常用的常用的酶和底物有哪些

2021-08-30 09:33:08 字數 2217 閱讀 8095

1樓:封琴瑟煙雨冢

在生物化學領域指參與生化反應的物質,可為化學元素、分子或化合物,經酶作用可形成產物。一個生化反應的底物往往同時也是另一個化學反應的產物。 酶是一種有催化功能的蛋白質。

底物就是,能和特異的酶結合的物質。 當酶結合其特異底物時,在適當條件下,就會被催化轉變為其它物質。 也就是被該酶反應的物質,如:

過氧化氫酶分解過氧化氫,過氧化氫就是該酶的底物。 酶底物太多了,因為人體內的成分和化學反應太多了,每種反應幾乎都有酶的參與,只要記住被該酶反應的物質,就是該酶的底物就行了,不用去查酶底物都有哪些,非要較真的話,可以告訴你,比如六大營養物質,他們會在體內被酶分解,人代謝出的積攢在人體中的一些物質如過氧化氫。

免疫酶組織化學技術的常用酶及其底物(一)辣根過氧化物酶在免疫酶技術中,辣根過氧化物酶(hrp)是z理想、應用z多的標記酶,是從一種稱為辣根的植物根部分離、純化獲得。hrp分子中含有含鐵血紅素基團(高鐵血紅素),是hrp的活性基團,在溶液中呈棕黃色,hrp中的高鐵血紅素與h202形成一種複合物,然後脫水,氧原子形成。幾種底物可使hrp氧化,z常用的有二種,即多酚和硝基鹽。

hrp的優點有以下幾個方面。(1)體積小(分子質量40kda),不會遮蓋抗原的結合部位,且穿透力強,易與細胞內抗原結合。(2)穩定且易獲得高純度酶製品。

(3)具有較高活性及特異性。(4)不溶性好,終產物不向周邊擴散。(5)組織中內源性酶較少,抑制方法較多。

(6)**相對較便宜。(7)特異性底物是過氧化氫(h202),可選用不同電子供體(髮色基團),使終產物呈不同顏色。

2樓:貓又又戀語

常用酶中還有個葡萄糖氧化酶

什麼叫 酶免疫測定

3樓:匿名使用者

以標記抗體檢測標本中的抗原為例,按照簡單的形式在試劑抗體過量的情況下進行:

ab*+ag—ab*ag+ab*

如在抗原抗體反應後ab*ag中的標記物「*」失去其特性,例如酶失去其活性,則不需要進行ab*ag與ab*的分離,可以直接測定遊離的ab*量,從而間接推算出標本中的ag含量,這種方法稱為均相酶免疫測定。

均相酶免疫測定的測定物件為小分子抗原或半抗原,主要用於藥物測定。均相酶免疫測定的測定模式為競爭抑制法,酶標記的是待測抗原,檢測試劑中尚有針對待測抗原的抗體和酶的底物。與抗體結合的酶就失去其活力,因此在反應中無需分離結合的酶與遊離的酶即可進行測定。

其反應過程與一般的生化測定無異,因此可直接用自動生化分析儀進行測定。均相酶免疫測定主要有酶擴大免疫測定技術和克隆酶供體免疫測定兩種。

異相酶免疫測定技術

酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑進行檢測的方法,是標記免疫技術的一種,2023年nakene和pierce利用酶使底物顯色的作用而得到與熒光抗體技術相似的結果,20世紀70年代初,酶標抗體技術開始應用於免疫測定,其後得到迅速發展。近年來標記免疫技術飛速發展,應用不同標記物,根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮。

酶免疫測定(enzymeimmunoassay,eia)是以酶作為標記物的免疫測定方法,利用酶的高效催化作用提高檢測的敏感度。根據抗原抗體反應後是否需要分離結合的與遊離的酶標記物,酶免疫測定可分為均相(homogenous)和異相(heterogenous)兩種型別。

相對於均相酶免疫測定技術,異相酶免疫測定在醫學檢驗應用更為廣泛,其反應過程中需經過結合標記物和遊離標記物的分離才能進行測定。分離的方法主要藉助固相載體,即將一種反應物固定在固相載體上,當另一種反應物與之結合後,可通過洗滌、離心等方法令其與液相中的其他物質分離,此類反應亦稱為固相酶免疫測定。engvall和perimann於20世紀70年代初首先建立這種方法,稱之為elisa。

所謂的免疫吸附劑指的是吸附在固相載體上的免疫活性物質elisa在臨床及科研中應用極為廣泛,已成為固相酶免疫測定的代名詞。

固相酶免疫測定方法

固相酶免疫測定主要是指elisa,其基本原理是:使抗原或抗體結合到某種固相載體表面(包被),並保持其免疫活性;用酶標記(另一種)抗原或抗體,保留其免疫活性和酶活性;在測定時,把待測標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應;用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開,結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例;加入酶反應的底物後,底物被酶催化顯色,故可根據顏色的深淺進行定性或定量分析。由於酶的催化效率很高,具有放大反應的效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。

根據測定物件的不同,elisa有多種反應型別。

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