如何閱讀質粒圖譜檔詳細,如何閱讀質粒圖譜檔 詳細

2021-08-19 13:04:05 字數 1069 閱讀 6941

1樓:匿名使用者

第一步:首先看ori的位置,瞭解質粒的型別(原核/真核/穿梭質粒)

ori的箭頭指複製方向,其他元件標註的箭頭多指轉錄方向(正向)。

第二步:再看篩選標記,如抗性,決定使用什麼篩選標記:

(1)ampr:水解β-內醯胺環,解除氨苄的毒性。

(2)tetr :可以阻止四環素進入細胞。

(3)camr:生成氯黴素羥乙醯基衍生物,使之失去毒性。

(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸轉移酶,使g418(卡那黴素衍生物)失活。

(5)hygr:使潮黴素β失活。

第三步:看多克隆位點(mcs)。它具有多個限制酶的單一切點,便於外源基因的插入。

如果在這些位點外有外源基因的插入,會導致某種標誌基因的失活,而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步:再看外源dna插入片段大小。質粒一般只能容納小於10kb的外源dn**段。一般來說,外源dn**段越長,越難插入,越不穩定,轉化效率越低。

第五步:是否含有表達系統元件,即啟動子-核糖體結合位點-克隆位點-轉錄終止訊號。這是用來區別克隆載體與表達載體。

克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體,還是要以實驗目的為準繩。

質粒圖譜怎麼看 基本特徵有哪些

2樓:養你過年吃肉

個人bai認為,看質粒圖譜,

du1,該質粒的用途:篩zhi選,擴增

dao,表達,還版是報告?用一種低權拷貝數的質粒來擴增目的片段顯然不如高拷貝的質粒效率高;

2,質粒的宿主:原核質粒?酵母質粒?真核細胞質粒?

3,使用有無特殊要求:抗性,營養缺陷?

4,關鍵是研究:多克隆位點,上下游的限制酶位點是否合適,對於你要插入的目的片段,是否有高效、經濟的酶切位點;啟動子是什麼誘導機制?起始密碼子和終止子的位置?

如果插入你的目的片段,是否會移碼或提前終止?

5,如果你選用的是比較冷僻的限制酶,在多克隆位點外是否有該酶的酶切位點;

6. 標籤蛋白序列或報告基因序列在插入片段的上游還是下游?對後續實驗有無影響?祝好!

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