人外周血淋巴細胞分離液怎麼用,注意事項

2021-04-19 20:31:47 字數 833 閱讀 8914

1樓:落葉無聲和落葉

方法都差不多,關鍵自己實際操作還得摸索,費時費力,建議你直接買試劑盒,齊氏生物的試劑盒一般都會有詳細步棸,而且售後服務很周到。

2樓:匿名使用者

目前常用ficoll密度梯度離心法直接分離和純化外周血單個核細胞。

方法:1. 在短中管中加入適量淋巴細胞分離液。

2. 取肝素抗凝靜脈血與等量hank's液或rpmi1640充分混勻,用滴管沿管壁緩慢疊加於分層液麵上,注意保持清楚的介面。水平離心2000rpm×20分鐘。

3. 離心後管內分為三層,上層為血漿和hank's液,下層主要為紅細胞和粒細胞。中層為淋巴細胞分離液,在上、中層介面處有一以單個核細胞為主的白色雲霧層狹窄帶(如下圖),單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞。

此外,還含有血小板。

4. 用毛細血管插到雲霧層,吸取單個核細胞。置入另一短中管中,加入5倍以上體積的hank's液或rpmi1640,1500rpm×10分鐘,洗滌細胞兩次。

5. 末次離心後,棄上清,加入含有10%小牛血清的rpmi1640,重懸細胞。取一滴細胞懸液與一滴0.2%臺盼蘭染液混合,於血球計數板上,計數四個大方格內的細胞總數。

單個核細胞濃度(細胞數/1毫升細胞懸液)=

4個大方格內細胞總數

────────── × 104×2(稀釋倍數)

46. 細胞活力檢測:死的細胞可被染成蘭色,活細胞不著色。計數200個淋巴細胞。計算出活細胞百分率。

活細胞數

活細胞百分率=────── ×100%

總細胞數

用本法分離pbmc,純度在90%以上,收穫率可達80~90%,活細胞百分率在95%以上。

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