1樓：匿名使用者
兩種方法的原理不同：
電擊法: 使用瞬時高壓電（數千伏特）處理細胞懸液，微生物細胞膜在高壓電的作用下發生去極化，產生微孔，懸液中溶解的核酸即可通過細胞膜上的孔洞進入細胞內部。
化學法：使用低滲溶液處理細胞懸液（0.1m cacl2），微生物細胞膜結構會發生一些變化，使得細胞在熱激時（42度90秒）變得很容易從溶液中攝取dna。
具體機理目前仍然不是十分清楚，但是很有效.
做電擊轉化時，懸液中有近70%的細胞會因電擊而死亡，但是這種方法很直接，轉化效率很高。當需要高的轉化效率時，比如製作基因文庫，可以採用電擊轉化，另外，做酵母等真核生物轉化時一般都是電擊。
化學轉化法操作簡單，不需要特殊裝置，轉化效率足以滿足一般克隆實驗的需要，故使用範圍非常廣。
2樓：匿名使用者
受體細胞經過一些特殊方法（如：電擊法，cacl2等化學試劑法）處理後，使細胞膜的通透性發生變化，成為能容許外源dna分子通過的感受態細胞。進入細胞的dna分子通過複製、表達實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
大腸桿菌的轉化常用化學法（cacl2法），該法最先是由cohen於2023年發現的。其原理是細菌處於0℃，cacl2的低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的dna形成抗dnase的羥基-鈣磷酸複合物粘附於細胞表面，經42℃短時間熱衝擊處理，促使細胞吸收dna複合物，在豐富培養基上生長數小時後，球狀細胞復原並**增值，被轉化的細菌中，重組子中基因得到表達，在選擇性培養基平板上，可選出所需的轉化子。
ca2+處理的感受態細胞，其轉化率一般能達到5×106~2×107轉化子/ug質粒dna，可以滿足一般的基因克隆試驗。如在ca2+的基礎上，聯合其它的二價金屬離子（如mn2+、co2+）、dmso或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100~1000倍。
化學法簡單、快速、穩定、重複性好，菌株適用範圍廣，感受態細菌可以在-70℃儲存，因此被廣泛用於外源基因的轉化。
除化學法轉化細菌外，還有電擊轉化法，電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使dna進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環dna。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。
製備感受態細胞的關鍵是什麼
3樓：anyway丶
製備感受態細胞的關鍵是將外源dna分子引入受體細菌，使之獲得新的遺傳性狀。
主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達，不僅可以檢驗重組載體是否構建成功，最主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗，如蛋白質表達純化等工作。
擴充套件資料
製作方法
cacl2法
1.將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞
細胞膜通透性發生變化，極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子（如mn、co）、dmso或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。
2.此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
電轉法電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使dna進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環dna。
4樓：匿名使用者
儘量使細胞保持在低溫下，可冰浴，這樣可降低細胞代謝率，防治細胞的大量死亡。因為無培養基，代謝強，則會引起大量細胞死亡。
5樓：浙大阿米巴
熱激的時間和操作速度掌握好
常用感受態細胞製備方法有哪些？
6樓：小灰馬
方法一：
細菌轉化的方法多以mendel和higa（1970）的發現為基礎，其基本方法是用
冰預冷的cacl2或多種2價陽離子等處理細菌，使之進入感受態得以轉化。
用cacl2製備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞，常用於成批製備感受態細菌。本法適用於大多數大腸桿菌菌株，且迅速、重複性好。操作過程簡述如下。
1．從37℃培養16～20h的新鮮平板中挑取一個單菌落（如大腸桿菌dh52），或1ml新鮮的16～20h過夜培養物，轉到一個含有100mllb培養基的1l或500ml燒瓶中。於37℃劇烈振搖培養約2～3h（旋轉搖床200～300r/min），每隔20～30min測量od600值≈0.4。
2．在無菌條件下將細菌轉移到一個，用冰預冷的50ml聚丙烯離心管中，在冰上放置10～20min。
3．於4℃用sorvallgs2轉頭（或與其離心管相配的轉頭）以4000r/min離心10min，以**細胞。
4．倒數培養液，將管倒置1min以使最後殘留的痕量培養液流盡。 5．以10ml用冰預冷的0.1mmcacl2重懸每份沉澱，放於冰上。
6．於4℃用sorvallgs3轉頭（或與其相應的轉頭）以4000r/min離心10min，以**細胞。
7．倒出培養液，將管倒置1min以使最後殘留的痕量培養液流盡。
8．每50ml初始培養物用2ml冰預冷的0.1m cacl2重懸每份沉定，此時，可以迅速將細胞分裝成小份，液氮中冰凍，-70℃貯存備用。
9．用冷卻的無菌吸頭從每種感受態細胞懸液中各取200μl轉移到無菌的微量離心管中，每管加dna或連線反應混合物（體積≤10μl，dna≤50ng），輕輕旋轉以混勻內容物，在冰中放置30min。
10．將離心管放到預加溫到40℃的迴圈水浴中的試管架上，放置90s～2min，不要搖動試管。
11．快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻1～2min。 12．每離心管加800μlsoc培養基，用水浴將培養基加溫到37℃，然後將管轉移到37℃搖床上，溫育45min使細菌復甦，並且表達質粒編碼的抗生素抗性標記基因。 13．將適當體積（每個90mm平板可達200μl）已轉化的感受態細胞轉移到含200mmol/l mgso4和相應抗生素的sob培養基上。
14．將平板置於室溫至液體被吸收。
15．倒置平皿，於37℃培養，12～16h後可出現菌落。
方法二：
cassuper one-step ***petent cell preps kit 採用一種簡單便捷的方法處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞，便於質粒dna的轉化，可滿足一般實驗的要求。與cacl2法相比具有多種優點：使用方便，只需一步即可完成感受態細胞的製備；轉化效率略高於cacl2法，一般可達106-108cfu/μg，滿足一般實驗需要；感受態細胞製成後即可儲存於-70℃,無須加入甘油，並且經長期儲存活力無明顯下降。
準備工作：
1． 從液氮或低溫冰箱中取出的大腸桿菌凍存菌，在lb平板上劃線，37度過夜至長 出單菌落。挑形態飽滿的單菌落2個，分別接種5ml lb培養基中，37℃，250rpm， 過夜培養。
2． 次日從5ml lb培養物吸取200μl轉入50ml lb培養基中（250ml 錐形瓶），37 ℃，250rpm培養2小時，此時od600約0.4—0.5。
感受態細胞的製備：
3． 吸取1ml菌液到1.5ml離心管裡，5000rpm離心5分鐘，棄去上清。 4． 加入100μl預冷的solution a，懸浮菌體，冰浴30分鐘。
5． 此時感受態細胞已經制成可立即使用或-70℃儲存。 細胞轉化：
6． 在感受態細胞中加入100pg-10ngdna，混勻，冰浴30分鐘，然後42℃ 1分鐘熱 擊，再次冰浴2 分鐘。加入0.9ml lb 培養基，20μl solution b，37℃，振盪 培養1小時。
7． 取適當菌液（100-200μl）塗布相應抗性的平板。 8． 過夜培養約16個小時，數菌落數，計算轉化率。 補充說明：
1． 所用器具一定要清潔；
2． 操作步驟2 中培養基的裝量也是很重要的，建議裝量不要高於此值：500ml 錐形 瓶裝100ml培養基，250ml錐形瓶裝50ml培養基；
3． 在收穫菌體前半小時還可以在培養基中加入20mm的mgcl2 ，效果會更好一些； 4． 為保證細胞處於對數生長期，培養後的菌體的od值不要高於0.6； 5． 製備感受態細胞時所有操作儘量保證在冰上操作；
6． 細胞轉化操作步驟6中也可以不必進行熱擊，冰浴後直接加入新鮮lb，簡化操作 步驟，但轉化效率低於熱擊方法，適用於對轉化率要求不高的實驗。
方法三：
1、取1%大腸桿菌e.coli接種於含2ml lb培養基的試管中，37℃振盪培養過夜 2、取0.1ml過夜培養物轉種於含10ml lb培養基的三角瓶中，37℃振盪培養3h至od600=0.
3ml離心管中，冰浴10min。 4、在4℃下以4000rpm離心5min，去上清液
5、把菌體懸浮於15m1冰冷的0.1m cacl2溶液中，置冰上30min 6、然後再在4℃下以4000rpm離心10min，去上清液
7、將菌體懸浮於0.1ml cacl2溶液中，冰浴放置4-12hr備用。
方法四：
（1）將1ml過夜培養的細菌（如dh52、tg1、tm101）接種於100ml2×yt培養於500ml
燒瓶。於37℃刷烈振盪，通常≥200rpm培養的細菌密度約od550=0.2～0.5(5×107
cells/ml),需2～4h。
（2）將培養物放於冰上致冷10min，於4℃離心細菌培養物，10000rpm離心10min。 （3）棄除上清，將細菌懸浮於原始培養體積的一半（約50ml）的50mmcacl2和10mm tris·hcl（ph8.0）無菌冷凍液體中。
（4）將細菌懸浮放在冰上約5min，然後將懸浮物於4℃10000/rpm離心10min。
（5）棄上清，懸浮細菌於原始培養體積的1/15的50mmcacl和10mmtris·hcl（ph8.0）無菌冷凍中。此時的細胞是感受態細胞，即可用於轉化。
200μl分裝於無菌的1.5ml微量離心管中，貯存於-80℃冰箱中。
方法五：
tsb法（也是本人熱衷的方法） 1.藥品製備
1m mg2+
(1m mgso4 和 1m mgcl2等體積混合)，用0.22um濾膜超濾除菌。 tsb液（30ml/ 80ml菌液）（現配現用）：
peg3350 3g tryptone 0.3g yeast extract 0.15g nacl 0.
3g 2. 步驟： （1）活化菌株
（2）挑單菌落培養於5ml 的液笨培養基中
（3）取液體培養物50ul於80ml的液體培養基中進行擴大培養
（4）370
c培養3－4小時，od600在0.4－0.6 （5）離心，去上清
（6）加入20mltsb，重懸 （7）離心，去上清
（8）加入10mltsb，再加入15－20%的甘油，分裝儲存 注，整個操作過程均應在冰上進行。所用藥品均需滅菌。
轉化程式 （1）取出200μl感受態細胞慢慢使其溶化，並立即放於冰上，加入dna或連線反應混合物，dna量通常≤50mg。用手指彈打試管10次，使之混勻，然後放在冰上40～45min。 （2）將管放於42℃水浴中2min。
（3）然後每管直接加入1.0ml2×yt培養基，倒置混勻，並於37℃培養8～12h，幹浴或水浴，不需振搖。此期間使細菌生長並開始表達抗菌素。
（4）每200μl轉化混合物分別於6個2×yt瓊脂培養板上補充相應抗生素，並含有x-gal（20mg/ml）、iptg（200mg/ml）。
用於製備感受態的dh5a在冰上放了小時還能繼續製備感受態
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